三氧化二砷诱导CNE1凋亡及其对细胞周期的影响

目的 研究三氧化二砷对人鼻咽癌CNE1细胞凋亡及其细胞周期的影响。方法 应用形态学观察、原位末端标记法(TUNEL)、流式细胞术等方法对三氧化二砷诱导的鼻咽癌细胞CNE1进行检测和观察。结果 一定浓度三氧化二砷能诱导CNE1细胞凋亡,凋亡细胞具有典型的凋亡形态特征,TUNEL原位检测有典型凋亡细胞,流式细胞仪检测有凋亡峰,G2／M期比例升高,呈一定的剂量效应关系。结论 三氧化二砷能诱导人鼻咽癌CNE1细胞株凋亡及阻止细胞周期进展的作用。     

人乳头状瘤病毒协同60钴照射促进食管上皮细胞恶性转化

为探明人乳头状瘤病毒(HPV)和促癌剂对食管上皮致癌作用,人胚食管上皮细胞转染HPV协同60钴(60Co)放射观察其恶性转化.用HPV18E6E7AAV转染的人胚食管上皮(SHEE),培养至13代,分为4组,实验组分别用60Co2、4、8Gy照射,每周1次共4周;SHEE未经照射为对照组.细胞形态用相差显微镜观察;细胞DNA合成和定量用3H-TdR掺入和用流式细胞仪分析;染色体众数用常规方法分析;致瘤性用软琼脂培养和裸小鼠接种;HPVDNA用PCR检测.经60Co照射后细胞呈凋亡和坏死(危象期).8周后SHEE 4Gy组细胞增殖,增殖指数(34%)和3H-TdR摄入增高,软琼脂培养和裸鼠接种出现致瘤性.对照组SHEE组细胞增殖指数24%,伴有少数3H-TdR掺入,裸鼠未成瘤.染色体众数:对照组,58～62;4Gy组,63～65;两组HPV18E6E7 PCR呈阳性条带.此结果表明,用HPV18E6E7协同60Coγ射线可以使人胚食管上皮恶性转化,60Co γ射线有加速食管上皮细胞恶性转化作用.     

人乳头状瘤病毒诱导人胚食管上皮永生化细胞恶性转化

为了证实ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７基因诱导的人胚食管上皮永生化细胞（ＳＨＥＥ）６１代（ＳＨＥＥ６１）部份细胞（ＳＨＥＥ６１Ａ）已经恶性转化,以寻找监控细胞早期恶性转化的方法。对培养的ＳＨＥＥ第１０代（ＳＨＥＥ１０）和６１代（ＳＨＥＥ６１）细胞,用光学是为微镜和电子显微镜观察细胞形态及生长形式;用流工细胞仪分析细胞周期;用染色体Ｇ带核型分析和间期核染色体１、７、８号着丝粒探针荧光原位杂交９ＦＩＳＨ）检测细胞     

乙型肝炎病毒和黄曲霉素协同作用诱发人肝细胞癌细胞株的建立

为了研究人乙型肝炎病毒（HBV）和黄曲霉素（AFB1）在肝癌发生过程中的作用,我们用HBV感染的人胚胎肝细胞移植至裸鼠背部皮下,以后每周皮下注射AFB1,在裸鼠体内成功地诱发了人肝细胞癌。选3只裸鼠所形成的肿瘤组织,分别再接种裸鼠传代。在裸鼠体内传至5代后,将瘤组织在体外培养、传代,建立了3个肝癌细胞株,分别为CBH－1a、CBH－1b和CBH－2。对3个细胞株进行生物学特性分析发现,细胞生长迅速,接触抑制消失,细胞增殖核主数Ki67阳性细胞占38．2％,用EMA单抗检测证实为人来源细胞,核酸原位杂交显示,细胞中HBV－X和HBV－S基因阳性,PCR可扩增出X基因,证明HBV基因已到瘤细胞中,3个细胞株细胞再接种裸鼠皮下,可再生成肿瘤,此实验证明了HBV协同AFB1在个肝细胞癌发生过程中的病因作用。同时,为进一步研究HBV和AFB1在肝癌发生过程中的分子机制提供了细胞水平的模型。     

人乳头状瘤病毒诱导食管上皮永生化细胞的双相分化

研究中期永生化食管上皮细胞的表型,细胞遗传学和部份基因的改变,以阐明癌前病变的特征,SHEE是该院人人乳头状瘤病毒HPV18E6E7诱导的永生化上皮,传至61代已开始有少量细胞恶性转化。对永生化中期31代细胞用相差显微镜检查细胞形态改变和细胞生长状态（细胞接触和锚定生长）;流式细胞仪检测细胞周期;做染色体众数分析;多重PCR检查c-myc,p53,bcl-2和ras等基因。免疫组化检查细胞角蛋白和鬼臼毒素荧光标记检查肌动蛋白F（F－actin)。软琼脂培养的集落细胞接种SCID小鼠检查成瘤性。Western blot方法检测细胞内HPVE6表达蛋白。结果：培养细胞有两种不同分化形态,分化差的基底细胞和分化好的鳞状上皮;前者角蛋白和F－actin极少,后者含量丰富;细胞接触抑制和锚锭生长特性减弱,分析100个细胞染色体众数分二干系,56条（占30％）和61条（占24％）染色体,核型分析属上超二倍体,亚三倍体,多重PCR检查：c-myc,p53基因上调,bcl-2和ras基因阳性。用优选生长在软琼脂上的克隆细胞接种SCID小鼠,未成瘤;HPV18E6表达蛋白阳性。以HPV18E6E7诱导的食管永生化上皮31代细胞形态出现了双向分化,根据其形态表型,双染色体众数的细胞遗传学改变和某些癌基因上调等特性,可以认为SHEE31细胞是外处于癌前改变。