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1.
【目的】在白念珠菌中建立一个快捷方便经济的基因敲除与筛选标记再循环的DNA操作系统。【方法】通过ExoIII介导的不依赖于连接酶的克隆策略,在异源筛选标记基因CmLEU2、CdHIS1和CdARG4基因的两侧分别插入了loxP位点,成为筛选标记基因盒扩增的模板。全基因合成了经过白念珠菌密码子优化的rTetR元件,并组装成Tet-on启动子。将密码子优化的重组酶Cre基因置于该启动子控制下。然后将他们插入筛选标记基因CdHIS1和CdARG4的CDS区域,形成筛选标记基因再循环载体。【结果】构建了3个用于白念珠菌基因敲除的侧翼含有loxP位点的筛选标记基因载体,以及2个含有Tet-on启动子控制的Cre酶的载体用于筛选标记基因的再循环。【结论】成功构建了一个白念珠菌中可诱导的基因敲除和筛选标记再循环的载体系统并成功应用于多个基因缺失株构建。这个系统有助于快速构建白念珠菌的单基因和多基因敲除菌株。 相似文献
2.
白色念珠菌ALS家族基因的克隆与功能分析 总被引:1,自引:0,他引:1
利用CX2 0.5kb探针,研究在不同白色念珠菌菌株中CX2串联重复序列的分布,发现多种白色念珠菌中都含有这个重复序列。为证明CX2的表达与形态转变有关,选用了多种诱导和非诱导菌丝生长的条件培养白色念珠菌SC5314,然后用串联重复序列作控针进行Northern杂交分析,证明CX2 cDNA片段的表达与菌丝形态紧密相关。用它作为探针进行染色体定位和基因组Southern杂交分析,表明白色念珠菌中多 相似文献
3.
Cln3是酿酒酵母G1期周期蛋白中的一种,为了研究Cln3在细胞周期与形态发生中的作用,我们构建了酿酒酵母CLN3基因的缺失株,并对其表型进行了分析。结果显示,cln3缺失株对α信息素的敏感性增强,α信息素诱导的细胞周期停滞现象明显大于野生型菌株,这种增强作用不受Sgv1因子的影响。同时,与野生菌相比cln3缺失株的细胞形态也有明显变化,双倍体cln3缺失株细胞的顶端生长能力增强而单倍体细胞的侵入生长能力则受到抑制。结果表明,与酿酒酵母的另外两个G1期周期蛋白Cln1、Cln2不同,Cln3在形态发生中有其独特的功能与作用方式。 相似文献
4.
白念珠菌的致病性与其形态转变相关,白念珠菌的形态转换受各种外界信号和细胞内信号转导途径的调控。转录因子Flo8在酿酒酵母形态发生中起重要作用,我们将白念珠菌基因组文库导入flo8缺失株中,筛选能够校正flo8缺失株侵入生长缺陷的基因,分离得到一个与酿酒酵母蛋白磷酸酯酶甲基酯酶PPEl同源的基因,命名为CaPPEl。CaPPEl的基因编码区全长1083bp,推测编码一个361氨基酸的蛋白。在单倍体酿酒酵母中,CaPPEl基因的表达可以部分回复flo8缺失株的侵入生长缺陷,但是在MAPK途径缺失株中不能进行侵入生长。在双倍体酿酒酵母中,CaPPEl基因的表达可以部分激活MAPK途径成员缺失株的菌丝生长缺陷,但却只能在flo8缺失株中产生微弱的激活作用。结果表明CaPpel在酿酒酵母的假菌丝生长和侵入生长中参与的信号转导途径不同。 相似文献
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白念珠菌的致病性与其形态转变相关,白念珠菌的形态转换受各种外界信号和细胞内信号转导途径的调控.转录因子Flo8在酿酒酵母形态发生中起重要作用,我们将白念珠菌基因组文库导入flo8缺失株中,筛选能够校正flo8缺失株侵入生长缺陷的基因,分离得到一个与酿酒酵母蛋白磷酸酯酶甲基酯酶PPE1同源的基因,命名为CaPPE1.CaPPE1的基因编码区全长1083bp,推测编码一个361氨基酸的蛋白.在单倍体酿酒酵母中,CaPPE1基因的表达可以部分回复flo8缺失株的侵入生长缺陷,但是在MAPK途径缺失株中不能进行侵入生长.在双倍体酿酒酵母中,CaPPE1基因的表达可以部分激活MAPK途径成员缺失株的菌丝生长缺陷,但却只能在flo8缺失株中产生微弱的激活作用.结果表明CaPpe1在酿酒酵母的假菌丝生长和侵入生长中参与的信号转导途径不同. 相似文献
6.
逆转座子样元件Tcal用于白色念珠菌的分类鉴定 总被引:6,自引:0,他引:6
已分离到一中等重复序列以及具有逆转座子样结构的元件Tcal。Tcal两端存在两个完全相同同向排列的序列LTR388bp,中间被一5.5kbDNA片段隔开。以alpha及Tacl为探针对40多种来自美国和中国的临床分离到的致病菌株进行杂交分析,根据杂交图谱,这些白色念珠菌可被分成若干组、令人感兴趣的是来自同一地区菌种的遗传相关性比来自不同地区的大,比较URA3等基因的杂交结果,支持这种分析,尚未观察 相似文献
7.
酿酒酵母单倍体细胞能够与相反交配型的单倍体细胞发生交配。交配时酿酒酵母放弃原有出芽位点,根据信息素的浓度梯度,重新选择生长位点,向相反交配型细胞伸出突起进行极性生长。交配因子受体指导选择交配突起的位点,通过G蛋白激活Ste20p,将信号经由Ste11p、Ste7p和Fus3p组成的MAPK模块传递到Far1p和Ste12p等因子,调控相关基因的转录,抑制原有的出芽位点,选择新的生长位点,并使细胞周期停止在G1期,G蛋白与Cdc24p、Cdc42p和Bem1p等蛋白作用,聚集在细胞,使得肌协蛋白细胞骨架在交配突起处聚集,呈极性化分布,使细胞发生极性生长。 相似文献
8.
用寡聚核苷酸片段筛选白色念珠菌MAPK的基因家族 总被引:9,自引:6,他引:3
促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)是一类与哺乳动物p34^CDC2同源性很高的Ser/Thr蛋白激酶,在多个不同的信号转导途径中起作用。现有的实验语气表明,MAPK很可能在白色念珠菌形态发生中起作用。我们根据白色念念菌的已知的两个MAPK基因;CEK1与MKC1第Ⅶ亚结构域的核苷酸序列合成卫段27nt的寡核苷酸,作为探针来筛选白色念穆 相似文献
9.
在利用合成寡核苷酸片段和利用简并PCR方法筛选白色念球菌MAPK相关蛋白激酶基因的过程中,都得到了一个新的MAPK基因CEK2(Candida albicans extracellular signal-regulated kinase2)。CEK2基因全长为1119bp,编码373个氨基酸,白色念珠菌CEK1同源性达56%。CEK2与啤酒酵母FUS3基因同源性很高,核苷酸的同源 达57%,氨基酸 相似文献
10.
人睫状神经营养因子基因及突变体在大肠杆菌中的表达 总被引:6,自引:1,他引:5
人睫状神经营养因子(human ciliary neurotrophic factor,hCNTF)cDNA克隆入具有PL启动子的表达载体,转化大肠杆菌HB101,构建成表达hCNTF菌株。热诱导后,hCNTF的表达量达菌体总蛋白量的25%。用离子交换层析、凝胶过滤层析从菌体裂解液中纯化了hCNTF。SDS-PAGEhCNTF的分子量约为24kd,N端氨基酸序列分析结果与依基因核苷酸推导疗列相符。 相似文献