牛肉干中牛基因组DNA提取方法的比较研究

为得到一种快速、稳定、准确、优质的牛肉干DNA的提取方法,本研究比较了SDS法、改良CTAB法、酚-氯仿抽提法以及4种试剂盒提取法的提取效果。通过比较DNA的提取质量、提取效率,并对提取的DNA进行PCR扩增分析。DNA提取结果表明,7种提取方法均能从牛肉干中提取出DNA,其中采用SDS法、酚-氯仿法、试剂盒1法和试剂盒4法所提取的DNA质量较高,A260/A280比值在1.7~1.9之间。试剂盒3法提取所花的时间最少,DNA得率最高,但DNA的纯度最低。PCR扩增结果表明,7种方法所提取的DNA均能满足后续PCR扩增实验的要求。实验室可根据具体的实际情况选择使用DNA提取方法。     

microRNA-136对人鼻咽癌细胞5-8f的抑制作用研究

CpG岛的高甲基化是肿瘤中作为抑癌基因microRNA失活的重要表观遗传机制之一。利用UCSC预测hsa-miR-24、hsa-miR-126、hsa-miR-132、以及hsa-miR-136定位于CpG岛内部或附近,采用甲基化酶抑制剂5-Aza-CdR处理鼻咽癌细胞5-8f,经RT-PCR与MSP检测,结果表明hsa-miR-136在5-8f中存在高甲基化,5-Aza-CdR能逆转hsa-miR-136甲基化,恢复hsa-miR-136的表达。外源过表达hsa-miR-136能明显抑制鼻咽癌细胞5-8f的增殖;同时流式细胞技术检测显示,hsa-miR-136能诱导5-8f细胞发生晚期凋亡,迁移实验也显示hsa-miR-136能明显抑制5-8f细胞的迁移。综上所述,hsa-miR-136可作为治疗鼻咽癌潜在的靶标。     

5-Aza-CdR对膀胱癌细胞生长及hsa-miR-203表达的影响

许多研究表明,miRNAs在肿瘤中失活与特定的遗传和表观遗传机制改变有关,hsa-miR-203在膀胱癌组织和细胞中表达下调并扮演着抑癌基因的角色。为了验证hsa-miR-203在膀胱癌细胞中是否受DNA甲基化抑制,采用去甲基化抑制剂5-Aza-CdR(5-氮-2'-脱氧胞苷)处理5637和BIU-87膀胱癌细胞,MSP和RT-PCR检测表明,hsa-miR-203的启动子在5637和BIU-87细胞中存在完全的甲基化,而5-Aza-CdR能逆转hsa-miR-203启动子的甲基化状态,恢复hsa-miR-203的表达。MTT法测定显示,5-Aza-CdR使5637和BIU-87膀胱癌细胞增殖受到明显抑制,并呈时间和剂量依赖性。同时,流式细胞仪检测显示,5-Aza-CdR使5637和BIU-87膀胱癌细胞周期阻滞于G_0/G_1期。因此,5-Aza-CdR能抑制膀胱癌细胞5637和BIU-87增殖并干扰其细胞周期。hsa-miR-203启动子异常甲基化是其在膀胱癌细胞中低表达的重要机制,5-Aza-CdR能逆转hsa-miR-203基因的甲基化,恢复hsa-miR-203的表达,为hsa-miR-203作为膀...