人工合成的黑曲霉NRRL3135菌株植酸酶基因在毕赤酵母系统中的高效表达

本文以黑曲霉(Aspergillus niger)NRRL3135菌株植酸酶基因为对象,通过基因人工合成的方法去除了该基因的内含子与信号肽编码序列,换用在毕赤酵母(Pichia pastoris)中使用频率较高的密码子以优化其表达。该人工合成植酸酶基因(PhyA-as)以N端融合的方式正确插入到毕赤酵母表达载体pPICZαA。通过电击将重组表达载体整合入酵母染色体DNA中得到重组转化子。SDSPAGE结果与表达产物酶学性质研究表明植酸酶得到分泌表达,且与天然产物性质基本一致。筛选得若干株高产基因工程菌,其中SPANⅢ菌株达到了在摇床培养条件下,每毫升发酵液产生165000u植酸酶的水平,基本满足工业化生产的要求。     

丙型肝炎病毒NS4区基因的克隆,序列分析及其表达

用RT－PCR法从一名抗-HCV阳性献血员血清中扩增到约900bp的DNA片段,经EcoRI酶切后插入pET17Xb表达质粒。SDS－PAGE表明重组质粒在约65kD处有融合蛋白表达,表达蛋白含量约为24％。对其插入片段进行序列分析：核着酸长度为945bp,A：T：G：C比例为18．6：21.9:30.5：29.0,G/C含量占59％,与其它一些HCV殊比较,核着酸同源性Ⅰ型为77．1％．Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ型均＜70％．Ⅱ型各株均＞90％;氨基酸序列比较的同源性Ⅰ型为857％,Ⅲ、Ⅳ、ⅤⅥ型各株均＞70％,Ⅱ型各株均＞93％。NS4基因的克隆和表达为其基因和产物作用的进一步研究奠定了基础。     

人工合成的黑曲霉NRRL3135菌株植酸酶基因在毕酵母系统中的高效表达

本文以黑曲霉（Aspergillus niger)NRRL3135菌株植酸酶基因为对象,通过基因人工合成的方法去除了该基因的内含子与信号肽编码序列,换用在毕赤酵母（Pichia pastoris）中使用频率较高的密码子以优化其表达。该人工合成植酸酶基因（PhyA-as)以N端融合的方式正确插入到毕赤酵母表达载体pPICZαA。通过电击将重组表达载体整合人酵母染色体DNA中得到重组转化子。SDS－PAGE结果与表达产物酶这性质研究表明植酸酶得到分泌表达,且与天然产物性质基本一致。筛选得若干株高产基因工程菌,其中SPAN－Ⅲ菌株达到了在摇庆培养条件下,每毫升发酵液产生165000u植酸酶的水平,基本满足工业化生产的要求。     

断奶仔猪肠道菌群的研究

研究断奶仔猪在不同生理状况下的肠道菌群,结果表明：健康仔猪肠道内容物中,从十二指肠到结肠,所测定的８种细胞数量都随肠段后移而逐渐增加,４３日龄仔猪肠道内容物中以乳杆菌、肠球菌和梭菌占绝对优势,双歧杆菌次之;与健康仔猪相比,下痢仔猪肠道中肠球菌、梭菌和乳杆菌等优势菌群的数量明显低于对照组;饲喂了含肠球菌的活菌制剂的仔猪肠道中双歧杆菌和类杆菌的数量比对照组明显增加,但肠球菌数量却无显著改变。     

猪源肠球菌的分离及生物特性的初报

本研究从猪粪便中分离了肠球菌两珠,经菌种鉴定两珠菌均为屡肠球菌。其生物特性的研究表明：可耐受15的胆盐和6％NaCI高盐,在pH3．0条件下可存活,对绝大多数抗生素耐药。