自制组织芯片穿刺工具及芯片手工制作技巧

组织芯片（tissue chip TC）技术是将数十个乃至上千个的组织样本,整齐有序地排列在同一张载玻片上,而形成的微缩组织切片;又称组织微阵列（tissue microarray TMA）技术。组织芯片的制作方式主要有石蜡切片法和冷冻切片法,目前以石蜡切片法为常用。现在还有商品化的组织芯片制作仪,如美国（Tissue Arrayer,Beecher Instrument,USA）生产的,但这套产品价格昂贵。所以,手工制作技术更经济、实用,其方法的改进层出不穷。我们采用一次性穿刺针手工制做穿刺工具,用普通石蜡包埋样本,制做组织芯片,收到了满意的效果,现将制做主要程序和技巧介绍如下。     

菝葜科种皮微结构特征及其分类学意义

在光学显微镜和扫描电镜下对菝葜科Smilacaceae3个属(菝葜属Smilax、肖菝葜属Heterosmilax和Ripogonum属)共53种5变种植物的种子形态及种皮微形态特征进行了研究。结果表明其种子形状为球形、半球形或钝三角形。在扫描电镜下种子表皮纹饰可分为7种类型,即脑纹型、粗脑纹型、网纹型、细网纹型、孔穴型、密孔穴型和细条纹型。根据种皮微形态的特征,对菝葜科内属间和属内组间的关系进行了探讨。种皮形态分析结果支持将Ripogonum属从菝葜科中分离、独立成科,支持将肖菝葜属与菝葜属合并的观点,这与孢粉学和分子证据的分析结果一致;推测肖菝葜属和菝葜属的土茯苓组sect.Coilanthus及草本组sect.Coprosmanthus的多数种类之间亲缘关系较近,菝葜组sect.China和圆锥组sect.Macranthae的大多数种类之间的亲缘关系较为密切,但种皮形态证据不支持Koyama将菝葜属分为6个组的观点。     

中国圆田螺典型精子及其发生的超微结构研究

运用光镜和电镜以及细胞化学方法 ,对中国圆田螺Cipangopaludinachinensis典型精子及其发生的超微结构进行了研究。根据染色质和细胞形态的变化 ,可将其典型精子发生分为五个时期 :精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞和成熟精子。精子发生过程中 ,线粒体逐渐增大 ,并随着轴的增生而不断发展为螺旋化线粒体系 ;染色质逐渐凝聚 ,经过颗粒化和纤维化而终呈均质 ;随着染色质的变化 ,细胞核先变小再拉长并螺旋化。精细胞期细胞核基部发生内陷 ,伴随有中心粒的移入 ,并向后方形成“9 2”式的轴。成熟典型精子单鞭毛 ,全长约 40 μm ,包括头、中、尾三段 :头段螺旋状 ,主要由细胞核构成 ,旋束单股 ;中段螺旋状 ,主要由线粒体和轴丝构成 ,旋束四股 ;尾段非螺旋状 ,主要由糖原颗粒和轴丝构成     

乌梢蛇胃上皮的组织学研究

用光镜和电镜观察了乌梢蛇胃上皮的组织结构,结果表明,1胃表面上皮均为单层柱状上皮,上皮细胞上部充满电子密度较高的椭圆形或杆状黏液颗粒,PAS反应呈强阳性;2胃体及幽门区上皮分别内陷形成单管状的胃底腺和幽门腺,无贲门腺;③胃底腺腺管分颈部和颈下部,颈部上皮细胞充满电子密度较低的近圆形的黏液颗粒,PAS反应呈强阳性,颈下部上皮细胞均分泌酶原颗粒,PAS反应呈阴性;④幽门腺细胞中亦充满电子密度较低、近圆形的黏液颗粒,PAS反应呈强阳性;⑤胃腺上皮细胞之间和腺细胞基部有不同类型的内分泌细胞分布.本文认为,乌梢蛇胃的消化能力较弱,其胃的进化在爬行动物中处于较低等的地位.     

紫花苜蓿种子萌发及幼苗生理特性对PEG6000模拟渗透势的响应

用不同质量浓度PEG6000(0%、5%、10%、15%、20%、25%、30%,渗透势分别为0、-0.06、-0.17、-0.32、-0.53、-0.79、-1.10 MPa)控制渗透势,研究紫花苜蓿种子萌发及幼苗生理特性对不同渗透势的响应.结果表明: 种子5项萌发指标均随渗透势降低呈先升后降趋势,-0.06 MPa时萌发指数和活力指数最高,-0.17 MPa时发芽率、发芽势和发芽指数最高;幼苗过氧化物酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性和叶绿素含量均随渗透势降低呈先升后降趋势,-0.17 MPa时各指标值最高;叶绿素a/b随渗透势降低呈先降后升趋势,-0.06 MPa时最低;游离脯氨酸、丙二醛含量和相对电导率随渗透势降低而持续升高.渗透势为-0.06～-0.17 MPa时,种子萌发和幼苗生理综合评价结果最优,是最适宜种子萌发的渗透势条件,而当渗透势低于-0.79 MPa时,对种子萌发产生抑制.     

百合目叶绿体rbcL基因核苷酸替代速率检测

分析了百合目主要类群叶绿体中编码核酮糖1,5二磷酸羧化氧化酶大亚基rbcL基因的42条序列,使用RRTree相对速率检测方法,详细研究rbcL基因在百合目7科间同义替代速率和非同义替代速率的变化.相对速率检测显示:百合目内秋水仙科(Colchicaceae)的同义替代速率和非同义替代速率均最快,金梅草科(Campynemat-aceae)同义替代速率最慢,百合科(Liliaceae)的非同义替代速率最慢,但在百合目各科间,无论同义替代速率还是非同义替代速率差异均不显著.     

菝葜科基于形态学证据的系统发育分析

对全世界范围分布的菝葜科Smilacaceae的79个代表种(包括了全部的属和组), 以分布于南美洲的Philesia Comm. ex Juss.和Lapageria Ruiz &; Pav.属为外类群, 选取包括花粉和染色体性状在内的47个广义的形态学性状进行了分支分类系统发育分析, 同时以表征分类的方法构建了距离树(NJ)辅助分析, 首次对世界分布的菝葜科各属间及属内的系统发育关系作了探讨。(1)Ripogonum与菝葜属Smilax +肖菝葜属Heterosmilax互为姐妹群, 但是距离较远, 支持将类菝葜属(新拟中文名)Ripogonum独立为科的观点; (2)肖菝葜属在菝葜科内处于较为进化的分支上, 并与菝葜属土茯苓组sect. Coilanthus的部分种组成一个具较高支持率(88%)的单系分支, 分析表明肖菝葜属并非是一个好属, 应归入菝葜属; (3)菝葜属6个组的划分大都没有得到支持, 只有东亚北美间断分布的草本菝葜组sect. Nemexia的单系得到很好的支持(93%); (4)分布于南美洲巴西的种类聚为一个单系类群, 表明它们可能有共同的起源, 但由于取样局限, 南美洲种类的系统地位有待进一步研究。     

应用SuperTRI方法重建百合目的系统发育关系

SuperTRI是Ropiquet等(2009)发表的一种新的超树方法,可以通过合并所有系统发育信息来共同组建大的系统发育树.该方法克服了超矩阵法和传统超树法的一些限制,使提出的系统发育假说可信度更高,更具有统计说服力.本文应用SupperTRI方法重建了百合目(Liliales)主要类群的系统发育关系,并与超矩阵法的分析结果进行了比较.结果显示:(1) SuperTRI方法产生了与超矩阵法相似的拓扑结构,但节点支持率相对较低,其中再现性指数对评判分支的可信性更容易理解,在系统树图示方法上也更直观;(2)SuperTRI系统树证实百合科、菝葜科、垂花科和菝葜藤科为一单系分支;黑药花科为一独立分支;秋水仙科、六出花科、刺藤科为一单系分支,但这3个大分支间的关系未明;支持白玉簪科和金梅草科互为姐妹群,是百合目最基部类群.     

贝叶斯推论及其在百合目分子系统学中的应用

贝叶斯推论作为进化生物学的最新进展,在适用复杂模型、大型数据集、计算速度和结果容易解释等方面明显优于其它算法。本文简要介绍了贝叶斯推论原理及其在分子进化和系统发育研究中的重要性,并使用该方法对百合目主要类群的系统发育关系进行了重建。结果显示,百合目rbcL基因最适合的DNA进化模型为GTR I G,贝叶斯法与距离法和最大简约法构建的系统发育树拓扑结构相似,没有显著差异,但是分辨率和支持率明显比后者高。贝叶斯分析结果显示,百合目内划分的7个科,除Smilacaceae科外,其余各科均为高后验概率(PP=1·0)支持的单系类群;文中作者还对各科间的系统关系进行了探讨。     

分子标记鉴定常山胡柚优良基因型的初步研究

本研究利用RAPD和ISSR分子标记对常山胡柚的优良基因型进行鉴定,并探讨常山胡柚的起源。从100个RAPD引物中筛选出12个多态性引物用于正式扩增,共得到117条DNA带,其中多态性DNA带64条,占扩增片段的54．7%;从105个ISSR引物中筛选出11个多态性引物用于正式扩增,共得到94条DNA带,其中多态性DNA带58条,占扩增片段的61．7%。RAPD和ISSR分析揭示了常山胡柚及其近缘种的一些特异性条带。ISSR共产生了15条特异条带,RAPD共产生12特异性条带。实验数据用AMOVA软件计算遗传距离,用NTSYS-pc软件构建UPGMA聚类树状图。结果显示,所有的基因型及不同种之间均能够彼此区分,分析得到的指纹图谱对常山胡柚种和基因型的鉴定具有潜在的应用价值,可用于优良基因型的鉴定。聚类分析结果显示常山胡柚和甜柚聚为一枝,确定了甜柚是杂交亲本之一,但是常山胡柚和柚的遗传距离较远,说明常山胡柚可能是甜橙、柚和柑桔属其他种的多重自然杂交的结果。