线粒体DNA提取方法的比较

目的：将提取线粒体DNA的碱变性法、Triton法、改进高盐沉淀法加以比较,以得到最方便快速提取线粒体DNA的方法。方法：分离Wistar大鼠小肠上皮细胞,用3种方法提取线粒体DNA,紫外分光光度法定量。用琼脂糖凝胶电泳和线粒体ATPase 8亚基基因PCR扩增产物鉴定所提取的线粒体DNA。结果：改进高盐沉淀法线粒体DNA量最多,Triton法最少。OD260／OD280均在1．78-l.85间。将改进高盐沉淀法提取线粒体DNA用于PCR扩增,测定出了线粒体DNA ATPase 8亚基基因序列。结论：改进高盐沉淀法提取线粒体DNA具有操作简单,产量多的优点,该法所提取mtDNA可用于mtDNA测序。     

LPS受体及信号转导研究进展

内毒素脂多糖（LPS）可激活单核／巨噬细胞,产生一系列炎症反应,而LPS跨膜信号转导是引起细胞效应的关键。本文主要综述LPS结合蛋白（LBP）、LPS受体（mCD14、sCD14）以及Toll群受体（TLRs）在LPS激活细胞及信号跨膜传递中的重要作用。推测LPS／LBP与细胞膜CD14结合后,TLRs以及细胞外富含亮氨酸片段的重复序列识别LPS,将LPS的刺激信号跨膜转导,激活NF－kB信号途径导致效应基因的表达。     

线粒体DNA编码细胞色素氧化酶亚基基因的进展

细胞色素氧化酶由13个亚基组成,其中构成级联反应核心的最大3个亚基(COXⅠ,COXⅡ和COXⅢ)由mtDNA编码,其余10个亚基(COⅣ,Ⅴa,Ⅴb,Ⅵa,Ⅵb,Ⅵc,Ⅶa,Ⅶb,Ⅶc,和Ⅷ)均由nDNA编码。COXⅠ亚基与hemea、hemea3、CuB结合,直接参与质子泵过程;COXⅡ亚基与CuA结合,位于线粒体包质面与细胞色素C进行反应;COXⅠП亚基参与氧化还原连接的质子易位过程;其余10个亚基的功能尚不明确。COX是线粒体组装所必需的基因,其表达调控与nDNA和mtDNA相互作用有关。     

内毒素休克大鼠肝线粒体质子跨膜转运的改变

用稳态荧光探针标记技术动态观察内毒素休克大鼠肝亚线粒体质子跨膜转运的变化.发现,休克5 h ATP、NADH和琥珀酸钠所致的9-氨基-6-氯-2-甲氧基吖啶(ACMA）最大荧光淬灭值（ΔA_max）显著低于对照组(P＜0.05)、最大荧光淬灭时间（T_ΔAmax）、半数荧光淬灭时间（T_1/2ΔAmax）非常显著延长(P＜0.01),肝线粒体质子跨膜转运能力下降;膜脂分子烃链和膜脂深层次流动性下降;线粒体膜PLA₂活性增加;血浆脂质过氧化产物MDA和线粒体MDA含量均显著增加.可能膜脂质过氧化和磷脂酶A₂的水解是引起内毒素休克肝线粒体质子转运功能改变的重要因素.     

酶联荧光法测定失血性休克兔骨骼肌ATP含量

休克时全身血液供应不足,组织缺氧,三羧酸循环和线粒体呼吸链的功能受抑制,往往导致组织ATP的合成下降。因此测定休克时组织ATP的含量,可以反映细胞的能量代谢障碍。我们对G.Paul介绍的组织ATP测定方法在样品取材和试剂保存方面作了改进,并且测定了实验性失血性休克模型以及复苏条件下家兔骨骼肌组织ATP的含量。现将结果和方法报告如下。材料和方法一、材料成年家兔37只,性别不拘,体重2.0—3.0 kg。分为三组:假手术组11只;平衡盐液复苏组13只;平衡盐液 ATP-MgCl_2     

家兔失血性休克时细胞膜电位的变化及其可能机制

应用超微电极技术在体测定骨骼肌细胞膜电位(Skeletal Muscle Cellular Membrane Potential 简称SMCMP)可以直接反映和监测休克状态下细胞膜和细胞功能的改变,但是有关休克时SMCMP下降的机制尚有争议。本实验应用“半浮置”式玻璃超微电极技术在体测定SMCMP的实验方法,同时观测家兔失血性休克不同时相中SMCMP和血乳酸、SMCMP和骨骼肌组织ATP含量之间的相互关系,以期探讨休克时SMCMP的变化及其可能机