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重组人骨形态发生蛋白-6的表达、纯化及其活性分析 总被引:4,自引:1,他引:3
利用RT-PCR从人胎盘组织中获取BMP-6成熟肽的cDNA 片段,并克隆到表达载体pET-15b中, 构建hBMP_6成熟肽的非融合蛋白表达质粒pET-BMP6,转化E.coli BL21(DE3)。IPTG 诱导4h后,工程菌高表达rhBMP-6成熟肽,在SDS-PAGE上出现预期的新蛋白带(≈15kD), 约占菌体总蛋白的10%,表达产物以包涵体形式存在。分离和纯化的包涵体溶解于8 mol/L尿素,在变性溶解状态下经阳离子交换层析,得到目的蛋白纯度达95%以上。再经稀释复性后,约80%的rhBMP-6形成同源二聚体。体外活性分析结果显示:rhBMP-6可以提高C3H10T1/2 细胞碱性磷酸酶活性及促进I型胶原、Osterix(Osx)和骨钙素(Osteocalcin)等成骨细胞表型转化标记基因mRNA的表达,证明制备的rhBMP_6具有诱导非骨源性细胞分化成为成骨细胞的作用。 相似文献
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摘要: 为了研究遗传性先天无虹膜(Hereditary congenital aniridia)患者发病的分子遗传学机制, 采用PCR扩增PAX6基因编码区的11个外显子(exon 4-13)及外显子和内含子相连接的区域、PCR产物直接测序的方法对1个遗传性先天无虹膜家系的所有成员进行了遗传突变分析。结果表明, 在家系中两个患者的PAX6基因exon 11均存在c. 1286delC新突变。此单个碱基的缺失造成了移码突变, 导致肽链自309位氨基酸开始产生一段含55个氨基酸的异常肽段, 并产生提前终止密码子(Premature termination codon, PTC), 使PAX6蛋白羧基端的59个氨基酸缺失。另外, 通过PCR-RFLP分析的方法对家系中所有正常成员和50名中国汉族健康对照个体基因组DNA进行分析均未检测到该突变。 相似文献
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