小鼠生精细胞染色质与染色体构筑的扫描电镜研究(简报)

正常情况下,染色质和染色体在细胞内呈高度致密状态,在光镜和透射电镜下常呈浓染的斑块状。由于方法学上的困难,至今对染色质乃至染色体的微细结构,仍缺乏清楚的了解。特别是关于染色质如何凝缩形成染色体方面,现仍存在有争论。扫描电镜的冷冻割断技术,曾被用于对游离细胞间期核染色质的观察,并取得了较好的     

小鼠生精细胞染色质与染色体构筑的扫描电镜研究（简报）

It remains unclear about the intermediate construction of chromosome due to its highly compact nature and the limitation in methods. The present study was designed to investigate the construction of chromatin and mitotic chromosome in situ with scanning electron microscopy. Mouse testes were selected as the material, because of in which the spermatogenic cells divide actively and successively to form the sperm. Such a feature would be able to study the structure of mammalian chromatin and chromosomes along with the change of nuclear cycle. The animal were perfused with 200 ml of 0.075 mol/L KCl hypotonic solution to remove blood and placed for 15-20 min on ice followed by 0.5% glutaraldehyde and 0.5% formaldehyde for fixing. Through treated by the routine process of fractured and freeze dried with t-butyl alcohol, the specimens were then coated with a 3 nm thick platinum and observed with Hitachi S-430 scanning electron microscopy. It was found that the hypotonic treatment with 0.075 mol/L KCl solution was suit for demonstrating the nuclear structure, when the organelles were well preserved. The chromatin fibers of 10-30 nm and 80-125 nm in diameter could be recognized in the interphase nuclei, which were arranged losely at the region of euchromatin, and folded with each other into chromatin masses at the region of heterochromatin, while the chromatin fibers with the diameter of 80-125 nm often could be viewed on the mitotic chromosomes. Since its presence in interphase nuclei and mitotic chromosomes, it was considered that the chromatin fibers with 80-125 nm in diameter might play a role in the condensation of chromosome, serve as a type of the intermediate structure.     

上调Sp1表达对小细胞肺癌耐药细胞的化疗增敏作用

探讨转录因子Sp1对人小细胞肺癌足叶乙甙耐药细胞H446/VP的化疗增敏作用。采用脂质体转染Sp1质粒进入细胞,MTT法检测细胞对足叶乙甙作用的半数抑制浓度(IC50);AO/EB双荧光染色观察细胞死亡率;RT-PCR和Western印迹检测Sp1、拓扑异构酶Ⅱα(Topo Ⅱα)和拓扑异构酶Ⅱβ(Topo Ⅱβ)mRNA和蛋白质表达。结果:细胞转染Sp1质粒后IC50明显降低,细胞死亡率明显增加。RT-PCR和Western印迹检测可见,H446/VP-Sp1细胞中Sp1、Topo Ⅱα的mRNA和蛋白质表达量均较转染前明显增加,而Topo Ⅱβ表达无显著性差别。研究表明,上调Sp1表达可提高人小细胞肺癌耐药细胞中Topo Ⅱα的表达,为Topo Ⅱ抑制剂类药物提供了更多的作用靶点,使细胞对Topo Ⅱ抑制剂类药物的敏感度提高。     

DNA拓扑异构酶Ⅱ研究进展

TopoⅡ不仅对细胞的正常生命活动至关重要,而且在肿瘤发生、发展以及疗效等方面均扮演重要 角色。关于TopoⅡα表达调控及其影响因素大致可以分为三个方面。其一,蛋白激酶类成分多直接作用于TopoⅡα蛋白质,影响其生物活性,并且与TopoⅡα活性的周期性特点有关,其二,既能作用于基因水平又能从蛋白质水平影响TopoⅡα的物质,主要包括p53和Rb蛋白等。最后,转录调节因子类成分则主要是从基因水平调控TopoⅡα的表达。针对TopoⅡα和β异同,二者不仅在结构和分布方面有所差别,而且在功能上也各有侧重。特别是在药物敏感性与抗药性方面TopoⅡα与β也有一定的区别。因此,加强对TopoⅡα表达调控的研究,特别是开展对TopoⅡβ表达调控研究,以及深入探讨TopoⅡα和β结构和功能特点,不但对于了解相关作用机制,而且对提高肿瘤诊断、治疗效果具有重要意义。     

阿克拉霉素协同顺铂杀伤卵巢癌细胞中泛素表达

为探讨泛素在阿克拉霉素(aclarubicin,ACR)协同顺铂(cisplatin,CDDP)杀伤卵巢癌细胞中的作用,应用ACR及CDDP的药物血浆峰浓度,分别及共同作用SKOV3卵巢癌细胞株24h。采用吖啶橙、嗅乙啶双荧光染色观察细胞活率;克隆培养观察克隆形成率,以及免疫细胞化学方法检测泛素表达。结果可见:细胞活率,ACR组为78.3±3.1;CDDP组为70.1±6.6;ACR和CDDP共用组为50.8±3.2(P<0.05)。克隆培养显示,ACR和CDDP共用组能够显著抑制细胞的生存能力。同时,两药共用组细胞内泛素表达水平明显高于药物单用组。以上结果表明:ACR与CDDP合用能够提高对卵巢癌细胞杀伤效果,泛素-蛋白质降解途径在其中发挥重要作用。     

IL-18基因转染对大鼠C6胶质瘤细胞生长特性的影响

探讨IL-18基因转染对大鼠C6胶质瘤细胞生长特性的影响。用MTT法和流式细胞术检测C6／IL-18细胞和C6细胞的增殖特性和细胞周期分布。免疫细胞化学检测C6／IL-18细胞和C6细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)、波形蛋白表达。结果显示,与C6细胞相比C6／IL-18细胞的增殖能力降低,G0/G1期细胞增多而G2／M期细胞减少;PCNA、波形蛋白表达降低。研究表明,IL-18基因具有抑制C6胶质瘤细胞增殖、降低其恶性程度的作用。     

染色质凝聚与细胞凋亡

细胞凋亡是由基因控制的细胞主动死亡方式。现已知体内多种组织的细胞通过凋亡途径实现自身代谢转变;如胚胎细胞、胸腺细胞、T和B淋巴细胞、晶状体细胞、肠上皮、乳腺上皮、前列腺上皮以及成纤维细胞等。细胞凋亡不但在个体发育、免疫细胞的增殖、分化、成熟等生理过程中具有独特的意义,而且对机体自身监测清除突变细胞和肿瘤细胞等方面也有重要     

阿克拉霉素对顺铂和足叶乙甙杀伤卵巢癌细胞的影响

有效化疗药物的选择对于提高卵巢癌的治疗效果至关重要。本应用MTT法,分别测定了阿拉克霉素（Aclarubicin,ACR）血浆峰浓度与不同浓度顺铂（Cisplatin,CDDP）或足叶乙甙（Etoposide,VP-16）合用对SKOV3卵巢癌细胞24h的抑制率,并分析药物合并效应。采用荧光染色观察细胞凋亡;琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂;并用western印迹检测TopoII表达与药物作用之关系。结果表明,ACR对VP-16具有拮抗作用;与药物单用相比,二合用后使细胞凋亡率减少、DNA断裂减少,拓扑异构酶II表达增强。CDDP单用可以促进TopoII表达。ACR与CDDP和对卵巢癌细胞的抑制具有协同效果;表现为细胞凋亡率增加、DNA断裂增加,TopoII表达降低,尤其对TopoIIβ表达的抑制作用明显。因此认为：ACP与CDDP合用能够提高对卵巢癌细胞的抑制效果,TopoII是其重要的作用靶点。该结果对于临床治疗具有一定的参考意义。