一种多基因串联共表达载体的构建

为了构建一种可用于串联共表达多个基因的原核表达载体,通过PCR引入点突变,对商业载体pET-22b的酶切位点进行定向改造,设计独特的XbaⅠ/SpeⅠ模块。获得改造成功的载体pET-m22b,测序结果显示启动子、核糖体结合位点、多克隆位点及终止子均位于XbaⅠ和SpeⅠ两酶切位点间。选取不同来源的基因进行串联组合及表达鉴定,四个基因成功组合于同一载体中,表达效果良好,各基因表达效率不受明显影响。研究构建的载体pET-m22b,使多基因的共表达更加便捷,为蛋白复合物的表达与纯化、代谢通路的异源重建及其优化等研究奠定了良好的基础。     

金鱼PP2A调节亚基PR55γ基因的克隆及表达分析

蛋白磷酸酶2A是一种重要的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶,对于调控多细胞的生命活动起重要作用。以金鱼大脑为材料,运用RT-PCR技术克隆得到PP2A调节亚基B55家族中PR55γ基因编码区部分序列。结果显示PR55γ基因cDNA长1218 bp,编码的多肽共含405个氨基酸。序列分析表明,该基因编码的蛋白与已知其他物种对应的PR55γ蛋白质均有着很高的同源性。用RT-PCR的方法检测了PR55γ基因在金鱼不同组织和胚胎发育不同时期的mRNA表达水平。结果表明,PR55γ基因表达呈现明显的组织和胚胎发育阶段差异性。在成体组织中,仅在大脑和鳍中有表达。在胚胎发育过程中,PR55γ从神经胚开始出现,整体呈现上升趋势,在出膜期达到最高水平。据此推测,PR55γ基因可能在金鱼胚胎发育中具有多种重要作用。     

口腔种植体周围细菌感染病原菌分布特点及细菌感染的危险因素分析

摘要 目的：观察口腔种植体周围细菌感染病原菌分布特点,分析细菌感染的危险因素。方法：选择360例于2018年7月~2021年5月在我院行口腔种植术的患者。根据是否发生口腔种植体周围细菌感染将患者分为感染组和未感染组。分离鉴定感染组病原菌种类。收集患者的临床资料,引起口腔种植体周围细菌感染的影响因素采用单因素及多因素Logistic回归分析。结果：360例患者中共有35例发生口腔种植体周围细菌感染,发生率为9.72%。共分离出49株病原菌,其中需氧菌14株（28.57%）、厌氧菌32株（65.31%）、有益菌3株（6.12%）;厌氧菌中又以口腔链球菌11株（22.45%）、牙龈卟啉单胞菌9株（18.37%）、产黑色素普雷沃菌7株（14.29%）为主。单因素分析结果显示：口腔种植体周围细菌感染的发生与吸烟史、慢性牙周炎病史、饮酒史、是否合并糖尿病、种植体周围牙槽骨情况以及口腔健康习惯有关（P＜0.05）;多因素Logistic回归分析显示口腔种植体周围细菌感染的危险因素是口腔健康习惯不良、种植体周围牙槽骨不良、合并糖尿病、有饮酒史、有慢性牙周炎病史、有吸烟史（P＜0.05）。结论：口腔种植体周围细菌感染的病原菌以厌氧菌为主,种植体周围牙槽骨不良、有慢性牙周炎病史、有吸烟史、合并糖尿病、饮酒史、口腔健康习惯不良是感染发生的危险因素,应针对上述因素进行适当干预。     

不同预处理条件对海水养殖废弃物发酵产氢的影响

【目的】利用海水养殖场有机废弃物厌氧发酵产氢,可在减少有机污染物的同时获取氢气。【方法】以海水养殖场有机废弃物为底物,比较嗜热酶(S-TE)、酸、碱、灭菌、微波不同预处理方法对厌氧发酵产氢效果的影响,并对发酵过程中底物性质变化[SCOD、可溶性蛋白质、可溶性糖、pH、VFAs(挥发性脂肪酸)和乙醇]进行探讨。【结果】灭菌预处理产氢效果最好,产氢率为22.0 mL/g VSS,酸处理的效果最差,产氢率为7.6 mL/g VSS。可溶性糖大量消耗之后,氢气不再产生。接种S-TE预处理污泥的底物能更多地释放营养物质,并在整个发酵过程中保持较为稳定的pH值。发酵过程中产生的VFAs主要成分是乙酸,在发酵后期出现乙醇。【结论】灭菌预处理是海水养殖场有机废弃物厌氧发酵产氢的最佳预处理方法,可溶性糖为这一过程主要的营养来源。     

含有分裂型内含肽DnaE基因的表达盒设计、合成及高效表达载体的构建

目的:建立一种简便、快捷的基因从头设计、优化与合成策略,进行含有分裂型内含肽DnaE基因的表达盒全合成并构建高效表达载体。方法:以免费软件GeneDesign 3.0为主要平台,同时结合Tandem Repeats Finder、UNAFold等不同生物信息学软件,对含有DnaE基因、合适酶切位点的表达盒进行设计与分段合成;合成寡核苷酸片段通过重叠PCR进行组装与克隆。结果:利用建立的设计流程,合成了大小为44～64 nt的14段寡核苷酸片段,通过重叠PCR,实现了14段寡核苷酸片段的一次性组装,经过克隆、酶切鉴定、序列分析得到了序列完全正确的表达载体。结论:建立了一套有效的、基于免费软件的基因从头设计与合成的策略,构建了可以用于环肽小分子文库表达与筛选的表达载体。     

烟草花发育过程中花药和花粉IAA分布规律的研究

以烟草（Nicotiana tabacumL.）花药为材料,通过4’,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染色详细观察花粉发育过程,获得了花药发育时期与花蕾大小的对应关系;通过吲哚乙酸（IAA）单克隆抗体、免疫组织化学技术以及DR5∶∶GUS转基因植株的GUS活性对花药和花粉发育过程中生长素的分布规律进行了研究。免疫酶标记结果表明,在不同的花药发育时期IAA水平呈现出明显的差别。小孢子母细胞时期,IAA在整个花药中均有分布,并且在小孢子母细胞发育晚期,IAA信号集中在小孢子母细胞的细胞核中;随着小孢子母细胞减数分裂后形成四分体,IAA信号逐渐减弱,四分体中几乎没有信号;单核花粉期的花药中IAA信号进一步减弱,仅存在于花药壁中;待小孢子继续发育为成熟二核期时,花粉和整个花药组织中均出现较强的IAA信号。GUS活性检测结果表明,烟草DR5∶∶GUS转基因植株中花药和花粉粒的GUS信号与IAA免疫酶定位结果基本一致。总的来说,IAA在烟草花药和花粉中的积累呈现出由强到弱、再由弱到强的分布规律,暗示IAA在被子植物花药和花粉发育过程中可能起着较为重要的作用。     

口腔颌面部间隙感染患者病原学、耐药性特点及CRP、PCT、D-D与创面愈合的关系研究

摘要 目的：探讨口腔颌面部间隙感染（OMSI）患者病原学、耐药性特点及血清C反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）、D-二聚体（D-D）与治疗后创面愈合情况的关系。方法：回顾性分析我院感染科于2018年7月-2021年5月收治的188例OMSI患者的临床资料，分析OMSI患者的感染部位、感染来源，感染病原学特点、耐药性特点；所有患者均采用封闭负压引流（VSD）技术治疗，根据治疗后创面愈合情况分为创面愈合良好组（n=153）和创面愈合不良组（n=35），比较两组患者的血清CRP、PCT、D-D水平。结果： 188例OMSI患者感染部位分布依次为颌下间隙（34.57%）、眶下间隙（27.13%）、咀嚼肌间隙（17.02%）、颊间隙（11.17%）、咽旁间隙（10.11%），感染来源占比依次为牙源性（74.47%）、腺源性（14.89%）、其他（10.64%）。188例OMSI患者中共分离检测出337株病原菌，其中需氧菌172株（51.04%），厌氧菌101株（29.97%），需氧－厌氧菌64株（18.99%）。主要感染致病菌对青霉素G、氨苄西林、红霉素具有高耐药性，克林霉素和亚胺培南对需氧菌、厌氧菌、需氧－厌氧菌均具有较高活性。治疗后创面愈合良好组CRP、PCT、D-D水平低于创面愈合不良组（P<0.05）。结论：OMSI患者以牙源性感染为主，感染部位多发生于颌下间隙和眶下间隙，病原菌类型多样且耐药情况较严重，临床治疗应合理应用抗菌药物，创面愈合良好患者血清CRP、PCT、D-D水平降低，因此，降低血清CRP、PCT、D-D水平可能有助于OMSI患者VSD术后创面愈合。     

ISL1在肿瘤发生中的作用

胰岛因子1（Islet1,ISL1）,又称胰岛素增强子结合蛋白1,以多效转录因子的身份在多种组织器官的发育及成熟中发挥作用．ISL1在心、胰腺、神经系统等组织器官的胚胎发育过程中发挥重要作用．Isl1基因敲除可导致小鼠心发育不全,4种胰岛内分泌细胞缺失,以及运动神经元分化、迁移障碍等．ISL1具有促进增殖、抑制凋亡的重要功能．近年的研究表明,ISL1在多种肿瘤发生中存在异常高表达．然而,其在肿瘤发生中的具体作用与机制尚未被阐明,有待进一步探索．     

博尔纳病毒的研究现状

博尔纳病毒是一种嗜神经性病毒.研究表明博尔纳病毒能引起从马、羊等家畜,啮啮类动物到灵长目几乎所有温血动物的自然和实验性感染,并可能参与了人类某些精神神经性疾病的发生.本文就目前博尔纳病毒对人及动物致病性及免疫性的研究近况作一综述.     

绿豆皮中黄酮类化合物提取工艺

研究了绿豆总黄酮的提取工艺。通过对固液比、乙醇体积分数、提取温度与提取时间的单因素实验确定水平点，设计4因素3水平实验，选用L9（3^4）正交表，优选绿豆总黄酮的最佳提取工艺为固液比1：50，φ（乙醇）为40％，提取温度70℃，提取时间120min。在此基础上得到绿豆皮中总黄酮的提取量为27．57mg／g，且5次平行的相对标准偏差为0．75％，总黄酮的平均回收率达97．5％。