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应用定点突变与分子模建方法研究蛋白酶抑制剂eglin C突变体对蛋白酶furin和kexin的抑制活力 总被引:2,自引:0,他引:2
蛋白质前体加工酶参与许多重要蛋白质闪体的加工成熟过程,哺乳动物来源的furin和酵母中的kexin是该家族的重要成员。首先人工合成了编码枯草杆菌蛋白酶抑制剂eglin C的基因片段,组装后在大肠杆菌中得到表达。以定点突变方法在野生型eglin C抑制活性中心的P1、P2和P4位引入碱性氨基酸残基可以将其改造为很强的furin抑制剂(Ki约10^-9mol/L),和kexin抑制剂(Ki约10^-11mol/L)。同时根据枯草杆菌蛋白酶和eglin C复合物的晶体结构,计算机同源模建了前体加工酶与eglin C突变体结构之间的相互作用,并结合实验数据得到以下结果:(1)P1位引入的碱性残基是该抑制剂活力的前提;(2)P4位碱性残基的引入可以极大地提高抑制剂活力约两个数量级;(3)P2 的碱性残基将有效提高抑制剂的活力。然而同时可以破坏抑制剂本身的稳定性。(4)野生型P3位的疏水性残基参与抑制剂活性环附近疏水核心的构成。 相似文献
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