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1.
禽流感病毒NS1蛋白对细胞的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
NS1蛋白为流感病毒非结构蛋白,只在病毒侵入宿主细胞后产生.目前NS1蛋白对细胞整体水平上的作用仍不清楚,为了解NS1蛋白在病毒感染细胞中的作用,构建了重组质粒pCMV-myc-NS1并将其转染A549细胞,利用双向电泳技术检测了受NS1蛋白调控的宿主蛋白,以期从蛋白质组水平上研究禽流感病毒与宿主细胞间的相互作用.同时,还检测了转染NS1对细胞增殖和细胞周期的影响.结果显示,NS1在细胞中的表达,能够明显引起宿主细胞代谢的变化,并通过阻滞细胞周期的正常进行而减缓细胞的增殖.  相似文献   
2.
目的:研究SARS冠状病毒(SARS-CoV)N蛋白与CYP4F3的相互作用。方法:应用免疫共沉淀、GST—pull down、BIACORE实验验证SARS—CoVN蛋白与CYP4F3的相互作用。结果:SARS—CoVN蛋白与CYP4F3能够相互作用,BIA-CORE实验证实CYP4F3与SARS—CoVN蛋白的亲和常数为Ko=4.3×10^-11。结论:SARS—CoVN蛋白与CYP4F3在细胞内、外均能形成复合物,这为进一步探讨SARS—CoVN蛋白在SARS致病机理中的作用奠定了基础。  相似文献   
3.
目的:应用重组杆状病毒表达系统制备由HA、NA、M1和M2蛋白组成的H5N1高致病性禽流感病毒样颗粒,为研究H5N1高致病性禽流感疫苗奠定基础。方法:构建能共表达A/chicken/Jilin/2003(H5N1)禽流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)、A/PR/8/34(H1N1)流感病毒基质蛋白(M1)和离子通道蛋白(M2)的2个二元重组杆状病毒,共同感染HighFive细胞,同时表达HA、NA、M1和M2蛋白,使这4种蛋白在感染的细胞内自主组装成病毒样颗粒。经差速离心和蔗糖密度梯度超速离心收获病毒样颗粒,通过Western印迹鉴定病毒样颗粒的组成,透射电镜观察病毒样颗粒形态,血凝试验测定病毒样颗粒的活性。结果:HA、NA、M1、M2蛋白在昆虫细胞中共表达,并组装成病毒样颗粒;电镜观察到病毒样颗粒的形态与流感病毒一致,直径约80 nm;血凝试验显示该病毒样颗粒具有凝集鸡红细胞的活性。结论:应用该方法可以制备流感病毒样颗粒,为H5N1流感疫苗研究提供了可行方案。  相似文献   
4.
目的:通过在大肠杆菌中分段表达禽流感病毒聚合酶酸性蛋白(PA蛋白),探索PA基因中可能影响表达的区域。方法:构建分段缺失的PA蛋白突变体,用IPTG在大肠杆菌RosettaGamiB(DE3)中诱导表达,比较各突变体的表达效率。结果:N端缺失长度在143~408个氨基酸残基之间的9个突变体在大肠杆菌中的表达水平较高;而突变体PA/K(Δ1-40aa)、PA/M(Δ1-56aa)、PA/N(Δ41-56aa)和PA/P(Δ57-75aa)的表达水平很低;全长PA蛋白和缺失N端20个氨基酸残基的突变体PA/L则检测不到表达。结论:PA基因的61~225bp和325~426bp可能是影响PA蛋白表达的2个重要区域,为下一步表达全长PA蛋白奠定了基础。  相似文献   
5.
hUBE2W是新近鉴定出的一种Ⅰ型泛素结合酶,可能在肿瘤发生和DNA损伤修复过程中起重要作用.RNA干涉是指通过形成局部双链RNA进而特异性地降解细胞内同源基因mRNA的机制,目前已成为基因功能研究的有力工具.通过构建H1-U6双启动子RNAi载体,可以在体内直接转录出针对hUbe2w基因的两段互补小RNA,更接近于生理状态下小干涉RNA的作用.利用RT-PCR方法从293FT细胞总RNA中扩增出hUbe2w基因,分别将其连接至质粒pGL3-Control,pCMV-myc和pDsRed-express-C1中,以便在mRNA水平和蛋白水平检测RNA干涉效果.RNA干涉载体分别与上述报告载体共转染293FT细胞,测定萤光素酶活性和hUBE2W蛋白表达水平,结果显示靶点125和259能够在mRNA水平和蛋白质水平显著降低hUbe2w的表达.  相似文献   
6.
于1999~2001年调查了神农架自然保护区6个地点不同栖息地的非飞行哺乳动物的物种丰富度。栖息地分为8类:原始林、择伐林(采伐枯立木)、次生林、灌木林、草地、常年性河流水溪、农田和人居住区。小型非飞行哺乳动物调查用捕鼠夹;大型非飞行哺乳动物调查主要根据皮张收购资料以及样线法和痕迹法;用10 m×10 m的样方调查林地树种丰富度。调查发现,神农架自然保护区有非飞行哺乳动物59种[不包括引进种梅花鹿(Cervus nippon)]。在同一海拔高度,原始林通常比择伐林和次生林的物种丰富度高,说明采伐严重降低了物种丰富度。对比同一栖息地不同海拔高度的物种丰富度,我们发现,在中海拔地段(800~1700 m)物种丰富度最高:如在原始林和次生林,海拔1700 m的东溪物种丰富度最高;在择伐林,海拔800 m的九冲物种丰富度最高。聚类分析显示,6个地点的哺乳动物物种组成可以分为两组:高海拔组(2100 m以上)和中低海拔组(1700 m以下)。各地点的哺乳动物物种组成与植被的垂直分布是一致的。各地点的物种丰富度与单位面积(100 m2)树种平均丰富度、栖息地类型数和海拔高度相关。3个环境变量间也是相关的:海拔高度对单位面积树种平均丰富度和栖息地类型数有重要影响。根据研究结果提出两点保护建议:第一,保护区的移民迁出和退耕还林工程应首先在物种丰富度最高的九冲进行,而后是东溪和下谷;第二,为了增加个体流和基因流,保护区东西两片相间的非保护区地带应划入保护区,建立栖息地廊道。  相似文献   
7.
原核表达中优化起始密码下游序列的软件设计与实现   总被引:2,自引:0,他引:2  
在原核表达中影响外源基因表达效率的因素有很多,这其中翻译起始效率起了非常重要的作用。翻译起始效率又主要受SD序列、SD序列与起始密码子之间的间距、DB(DownstreamBox)序列、mRNA翻译起始区(TIR)的二级结构和稀有密码子等因素的影响。主要针对DB序列和5′端稀有密码子的优化设计了软件。通过计算机对序列进行分析比对后,按照匹配碱基数、匹配位置、密码子使用频率平均值的顺序进行排序,给出一些优化序列,并给出了软件算法。  相似文献   
8.
目的:筛选与禽流感病毒基质蛋白M1相互作用的蛋白。方法:表达禽流感病毒基质蛋白M1,经Ni^2+柱亲和层析纯化,用表面等离子体共振(SPR)技术捕获BHK-21细胞裂解液中与M1相互作用的细胞蛋白,并进行质谱分析。结果:获得了纯度在85%以上的基质蛋白M1,并利用此蛋白捕获到宿主细胞肌球蛋白重链6。结论:肌球蛋白重链6与禽流感病毒基质蛋白M1可能存在体外相互作用。  相似文献   
9.
目的:克隆H5N1亚型禽流感病毒的NS1基因,并分析其序列特性。方法:通过RT-PCR方法克隆H5N1亚型禽流感病毒NS1基因,并对该基因片段进行测序,将此序列与数据库中不同时间、地点、宿主来源的H5N1亚型流感毒株NS1基因序列进行同源性比较。结果:获得了678bp的NS1全长基因,可编码225个氨基酸;其与毒株A/chicken/Jilin/hq/2003的同源性最高,二者的核酸和氨基酸的同源性分别为99.7%和99.1%。比对分析发现,该毒株NS1基因在第238-252位有15个核苷酸的缺失;进化树分析表明,它与1997年香港流行的H5N1亚型禽流感病毒毒株分别属于2个不同的分支。结论:克隆了一株H5N1亚型禽流感病毒的NS1基因,并初步分析了其序列特性,为进一步研究NS1基因的功能奠定了基础。  相似文献   
10.
致病岛是指细菌染色体上一段具有典型结构特征的基因簇,主要编码与细菌的毒力及代谢等功能相关的产物。病原菌必须要有一套高效的分泌系统才能将致病因子分泌到细菌表面或转运出细胞,并尽可能进入宿主细胞。现在已经发现了至少5套不同的蛋白分泌系统。本文就致病岛及其分泌系统的相关研究进展作一综述。  相似文献   
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