G418对IL—2基因包装细胞的筛选

本文用高浓度的G418(800μg/ml)和低浓度的G418(200μg/ml)对包装细胞PLXSN/IL-2/PA317细胞进行40天的选择筛选培养,使其细胞呈稳定状态生长时,收集上清液转染NIH/3T3细胞,进行病毒滴度测定。试图在高选择标记的情况下筛选出高表达目的基因的包装细胞。实验结果表明:高、低浓度的G418对PLXSN/IL-2/PA317包装细胞的选择作用相同,即包装细胞的病毒滴度同选择标记物浓度无关。提示可用低浓度的G418来维持包装细胞的生命。     

6巯基鸟嘌呤和干扰素对HL-60细胞中相关基因mRNA表达的调控

为研究6-巯基鸟嘌呤(6—TG)和干扰素(IFN—α和IFN—γ)对HL—60细胞中相关基因表达的调控作用及其与细胞增殖和分化的关系,实验观察了这两类因子对HL—60细胞的生长抑制作用,分化诱导作用及其对C—myc原癌基因mRNA和干扰素相关基因pIFN—IND-2的56KmRNA表达的调控作用。 结果表明:对于HL—60细胞的克隆生成,6—TG是强烈的抑制剂,而干扰素类几无抑制作用。在NBT实验中,这两类因子都产生了类似程度的诱导HL-60细胞向粒细胞方向的终末期分化。对Northern Blot的结果分析发现它们对相关基因产生了相似的调控作用。C—myc mRNA早期的增加和后期的明显减少;56K mRNA则有程度不同的增加现象。 结果提示:在HL—60细胞中C—myc原癌基因与其分化密切相关,pIFN—IND—2基因也可能与之有关。对相关基因的类似调控作用可能是6—TG与干扰素联合应用的分子生物学基础。     

转基因人肺腺癌细胞株的建立

以逆转录病毒ｐＬＸＳＬ为载体与人细胞介素２基因（ＩＬ－２）重组,用电穿孔技术将其重组子ｐＬＩＬ—２ＳＮ导入ＰＡ３１７细胞中,建立了逆转染病毒包装体系细胞ＰＡ３１７／ｐＬＩＬ—２ＳＮ。应用逆转录病毒包装体系细胞上清液去转染入肺腺癌细胞ＳＰＣ—Ａ１,经过２０天含Ｇ４１８培液的筛选式培养,历经了５０代的传代培养,获得了转白细胞介素２基因的人肺腺癌细胞株ＳＰＣ－Ａ１／ＩＬ－２。该细胞（ＳＰＣ－Ａ１／ＩＬ－２）经ＰＣＲ技术验证外源性目的基因（ＩＬ－２ｇｅｎｅ）导入细胞内,且证明该细胞能表达ＩＬ—２基因（有ＩＬ－２的分泌）。我们研究的目的是对肿瘤细胞的特异性抗原修饰、对肿瘤细胞进行处理。试图建立肿瘤疫苗。     

细胞信号传导和肿瘤

信号传递系统的存在及其过程是近年细胞生物学,分子生物学和医学领域的研究热点之一。信号传递异常与肿瘤等多种疾病的发生,发展和预后直接相关。本所述是迄今认识比较清楚的与肿瘤密切相关的几条信号传导途径,阐明它们的作用机制对于洞悉肿瘤发病机制并最终攻克肿瘤均有重要意义。     

pVVP3和pVHN核酸疫苗的构建、表达及对肿瘤细胞的作用

用pVAX1载体构建抗肿瘤核酸疫苗 .将鸡贫血病病毒 (CAV)的VP3基因和鸡新城疫病毒(NDV)HN基因插入载体pVAX1的多克隆位点 ,构建了 2个重组基因疫苗pVVP3和pVHN .转染OS732细胞 ,Western印迹及血凝试验检测HN基因表达状况及表达产物的活性 .RT PCR、DNALadder、TUNNEL染色检测VP3基因的表达及表达产物诱导OS732细胞凋亡作用 .酶切鉴定证实成功地构建了两个核酸疫苗 ,并能在真核细胞内表达 .含HN的核酸疫苗pVHN表达后具有血凝活性并致肿瘤细胞表面唾液酸含量降低 (P <0 0 5 ) .pVVP3的转染能导致OS732细胞凋亡 ,凋亡率可达87% .试验结果表明 ,pVVP3和pVHN两个核酸疫苗体外应用后能诱导肿瘤细胞凋亡并显著降低肿瘤细胞表面唾液酸含量