III型分泌系统抑制剂对铜绿假单胞菌PAO1毒性因子的影响

【目的】进一步研究III型分泌系统(Type III secretion system, TTSS)抑制剂对条件致病菌Pseudomonas aeruginosa PAO1的TTSS相关蛋白、鞭毛和纤毛等主要毒性因子的影响,评估TTSS抑制剂的防治效果及潜在风险。【方法】构建TTSS效应蛋白合成基因exoY和exoT转录报告质粒pAT-exoY、pAT-exoT,并将其转入菌株PAO1中。菌株PAO1(pAT-exoY)、PAO1(pAT-exoT) 与TTSS抑制剂共同培养后,检测exoY和exoT的表达。通过SDS-PAGE检测TTSS抑制剂对鞭毛结构蛋白FliC的影响。将PAO1单菌落穿刺接种于含有TTSS抑制剂的1%琼脂糖平板,观察细菌纤毛介导的蹭行运动(Twitching motility)。【结果】转录报告实验结果表明4个TTSS抑制剂可显著抑制exoY和exoT的转录;化合物TS52、TS53和TS94虽不影响胞内TTSS针状顶端结构蛋白PcrV的产量,但可抑制PcrV蛋白的胞外运输。化合物TS53可降低鞭毛结构蛋白FliC的产生。另外,化合物TS52、TS53和TS88可降低菌株PAO1的蹭行运动能力,但TS94可提高菌株PAO1的这种运动能力。【结论】TTSS抑制剂除通过抑制TTSS表达外,还可能通过影响其它毒性因子如鞭毛的合成、IV型分泌系统介导的蹭行运动等方式影响菌株PAO1致病性。     

饲料中非蛋白能量源对草鱼血清生化指标和肝脏组织的影响

<正>在鱼类饲料中,脂肪和碳水化合物是两种主要的非蛋白能量源。饲料中添加适量的非蛋白能量源可以节约蛋白质、减少鱼体氮排泄对养殖水体的污染[1]。然而,饲料中添加高水平的非蛋白能量源会影响鱼类的摄食和生长、造成鱼体脂肪大量蓄积,影响肉质和风味[2,3],并且大量的脂肪蓄积会增加其在体内的过氧化,导致生理状态发生变化影响鱼体的健康[4,5]。在鱼类中,肝脏是鱼体最重要的代谢器官,经常被作为营养和生理代谢状况的指示     

饲料蛋白水平对大规格草鱼生长、饲料利用和氮代谢相关酶活性的影响简

为探讨饲料蛋白水平对草鱼(Ctenopharyngodon idellus)生长、饲料利用和氮代谢的影响,以鱼粉和酪蛋白为蛋白源制备蛋白水平分别为15%、20%、25%、30%和35%的5种等能(13.71 kJ/g)饲料饲养草鱼[(209±10)g]8周。结果表明:饲料蛋白水平对草鱼的增重率、特定生长率、饲料效率均影响显著(P0.05),其中25%蛋白组最高。通过二次多项式的回归分析得出:当饲料蛋白水平为26.50%和27.20%的时候,特定生长率和饲料效率分别达到最高。15%蛋白组的摄食率显著高于其他蛋白组(P0.05)。蛋白质保留率和蛋白质效率随蛋白水平的升高而显著降低(P0.05)。各蛋白组的成活率、血清丙氨酸转氨酶活性和血清天冬氨酸转氨酶活性均无显著差异(P0.05)。血清总蛋白、血清尿素氮、肝脏天冬氨酸转氨酶活性、肝脏谷氨酸脱氢酶活性和肌肉腺苷酸脱氨酶活性随蛋白水平的升高显著增加(P0.05),而肝脏丙氨酸转氨酶活性先增加后稳定,这表明高蛋白组(30%和35%蛋白组)相对于低蛋白组(15%和20%蛋白组)有较多的蛋白质用于分解代谢提供能量。     

肉桂酸衍生物对铜绿假单胞菌PAO1 III型分泌系统的影响

【目的】铜绿假单胞菌是引起医院获得性感染最常见的条件致病菌,而III型分泌系统(Type III secretion system,TTSS)是其致病的主要因子之一。本文从合成的21个肉桂酸衍生物中筛选影响TTSS效应子(Effector)产生的化合物,并初步研究其作用机制。【方法】将TTSS效应子合成基因exoS的转录报告质粒pAT-exoS转入菌株PAO1中,获得PAO1(pAT-exoS)。待筛选的化合物与PAO1(pAT-exoS)菌株共培养6 h后,检测exoS基因的表达,从中筛选影响exoS基因表达的化合物。【结果】筛选结果表明：21个化合物中,3个化合物抑制exoS基因表达,2个化合物则促进exoS基因表达。此外,化合物TS128、TS143和TS160对菌株生长有明显的抑制作用。Western blot实验进一步证实筛选得到的化合物TS108、TS128和TS165可抑制ExoS的产生;化合物TS139和TS143则促进ExoS的产生。为进一步研究抑制剂的作用机理,过量表达TTSS主要的调控因子exsA基因可部分消除抑制剂TS108和TS165的抑制效果;而rsmZ rsmY双基因突变体PAO6421中添加抑制剂TS108和TS165并不能显著抑制exoS基因的表达,同样,抑制剂TS108和TS165也不影响受Gac/Rsm信号传导系统调控的群体感应信号分子的产生。【结论】抑制剂TS108和TS165的作用机制可能主要是影响esxA基因,从而影响exoS基因表达及蛋白产量。     

麦瑞加拉鲮幼鱼对12种原料表观消化率的比较研究

试验以麦瑞加拉鲮（Cirrhinus mrigala）幼鱼（3.88±0.06）g为试验对象,研究其对国产鱼粉、白鱼粉、花生粕、白酒糟、鸡肉粉、米糠、棉粕、菜粕、豆粕、玉米蛋白粉、玉米酒糟和羽毛粉的干物质、粗蛋白、粗脂肪、总能、磷、钙、镁、锌、铜、铁和锰的表观消化率。结果表明:12种试验原料的干物质、粗蛋白质、粗脂肪、总能、磷、钙、镁、锌、铜、铁和锰的表观消化率范围分别为24.93%-85.68%、50.02%-97.40%、51.89%-94.02%、39.18%-96.39%、9.72%-87.37%、3.47%-25.92%、26.11%-88.25%、12.63%-66.35%、41.33%-104.86%、10.69%-91.84%、4.42%-85.49%。其中包括干物质、粗蛋白和总能在内的主要营养物质的表观消化率以国产鱼粉和白鱼粉最高。除鱼粉外的其他原料中,干物质以花生粕、豆粕和玉米蛋白粉最高;粗蛋白以花生粕最高;粗脂肪以米糠和花生粕最高;总能以花生粕和鸡肉粉最高;白酒糟的干物质、粗蛋白、粗脂肪、总能的消化率最低。在矿物质元素表观消化率中,羽毛粉的磷、铜、铁和锰的表观消化率最高;米糠的锌表观消化率最高;钙的表观消化率以白鱼粉、豆粕和羽毛粉最高;镁的表观消化率以豆粕、羽毛粉和玉米酒糟最高;鸡肉粉的磷、钙、镁和铁表观消化率最低;花生粕和棉粕中锌的表观消化率最低;菜粕中铜的表观消化率最低;白酒糟中锰的表观消化率最低。因此,花生粕、豆粕和玉米蛋白粉是麦瑞加拉鲮幼鱼配合饲料中较优质的蛋白源,可进一步开发用于适量替代饲料中的鱼粉;米糠可作为较好的能量饲料;羽毛粉可作为饲料中较好的矿物质元素来源;白酒糟对麦瑞加拉鲮幼鱼而言营养价值最差。     

Ⅲ型分泌系统抑制剂对铜绿假单胞菌PAO1毒性因子的影响

【目的】进一步研究Ⅲ型分泌系统(Type Ⅲ secretion system,TTSS)抑制剂对条件致病菌Pseudomonas aeruginosa PAO1的TTSS相关蛋白、鞭毛和纤毛等主要毒性因子的影响,评估TTSS抑制剂的防治效果及潜在风险。【方法】构建TTSS效应蛋白合成基因exo Y和exo T转录报告质粒p AT-exo Y、p AT-exo T,并将其转入菌株PAO1中。菌株PAO1(p AT-exo Y)、PAO1(p AT-exo T)与TTSS抑制剂共同培养后,检测exo Y和exo T的表达。通过SDS-PAGE检测TTSS抑制剂对鞭毛结构蛋白Fli C的影响。将PAO1单菌落穿刺接种于含有TTSS抑制剂的1%琼脂糖平板,观察细菌纤毛介导的蹭行运动(Twitching motility)。【结果】转录报告实验结果表明4个TTSS抑制剂可显著抑制exo Y和exo T的转录;化合物TS52、TS53和TS94虽不影响胞内TTSS针状顶端结构蛋白Pcr V的产量,但可抑制Pcr V蛋白的胞外运输。化合物TS53可降低鞭毛结构蛋白Fli C的产生。另外,化合物TS52、TS53和TS88可降低菌株PAO1的蹭行运动能力,但TS94可提高菌株PAO1的这种运动能力。【结论】TTSS抑制剂除通过抑制TTSS表达外,还可能通过影响其它毒性因子如鞭毛的合成、IV型分泌系统介导的蹭行运动等方式影响菌株PAO1致病性。