t-PA昆虫细胞表达及特性分析

应用RT-PCR技术,从人黑色素瘤Bowes细胞株中扩增出人组织型纤溶酶原激活剂(tissue-typeplasminogenactivator,t-PA)cDNA。序列分析证实,与国外的报道完全一致。将含完整阅读框架的人t-PAcDNA克隆至昆虫细胞表达转移载体pBacPAK8中,获得重组质粒pBac-tPA。应用脂质体共转染法,将pBactPA和线性化杆状病毒BacPAK6DNA共转染Tn-5B-1昆虫细胞。经空斑筛选获得11株重组病毒。经PCR鉴定与生物活性测定,获得一株高效表达t-PA的重组病毒BactPA3。在含胎牛血清的培养基中,t-PA表达活性在感染(MOI≈10)后72h左右达到最高,为3.04×103IU／ml,即相当于1.8×104IU／106细胞;在无血清培养基中,t-PA最高表达水平相差不大,但时间为感染后132h左右。经SDS-PAGE纤维蛋白自显影分析,分子量为68kda左右。与从人黑色素瘤细胞培养液中提纯的天然t-PA相比,其受纤维蛋白原激活的特性、和纤维蛋白的亲和力及在血浆中的失活速率基本相同。表达的t-PA在血液循环中的半衰期为7min。     

雄性不育嵌合基因的构建及番茄转化研究

用从烟草里克隆的TA29启动子分离自Bacillus amyloliquefaciens的核糖核酸酶基因barnase,构建成雄性不育嵌合基因。再用农杆菌介导法转化番茄子叶,获得了具有雄性不育特征的转基因植株。 Abstract:The utilization of heterosis based on male sterility has great significance in raising crop yeld and improving quality.A tapetum-specific promoter TA29 from tobacco young leaves,and a Rnase gene-barnase from Bacillus amyloliquefaciens have been cloned for the construction of male sterile chimeric gene.Transgenic tomato plants with male sterile property have been obtained after transformation with this gene.     

细菌总蛋白含量测定方法的改进

采用超声波破碎细菌细胞后,用０．１ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ处理细菌样品,以Ｌｏｗｒｙ法测定细菌总蛋白含量,此法所测结果更接近于细菌细胞总蛋白的真实含量。