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目的：为进一步研究汉坦病毒包膜糖蛋白的糖基化与病毒的感染性和免疫原性等的关系,构建含有汉滩病毒（HTNV）囊膜糖蛋白（GP）糖基化位点突变体的重组假病毒。方法：利用定点突变的方法,分别突变了HTNV 76-118株的5个N-糖基化位点并克隆入慢病毒表达载体,与包装质粒共转染293T细胞,构建5株重组假病毒。感染HEK293细胞后,进行RT-PCR鉴定及免疫荧光检测。结果：经测序显示构建的含有N-糖基化位点突变体的5个重组假病毒原序列中的天冬酰胺（N）均被置换为谷氨酰胺（Q）。RT-PCR结果显示5个重组假病毒均有HTNV GP基因的表达。免疫荧光检测5个重组假病毒均可表达HTNV的Gn和Gc蛋白。结论：成功构建了含有HTNV包膜糖蛋白糖基化位点突变体的5个重组假病毒,分别命名为rLV-M1、rLV-M2、rLV-M3、rLV-M4和rLV-M5。本研究为明确N-糖基化对汉坦病毒生物学活性的影响提供了有利的研究工具,并为汉坦病毒疫苗及致病机理的进一步研究打下了一定的基础。 相似文献
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糖类抗原125(CA125)被认为是卵巢癌诊断的“金标准”，但在临床应用中普遍存在着特异性不高的问题．肿瘤形成和发展过程中常伴有糖基化修饰异常和糖链结构的改变，不同的肿瘤具有特异的异常糖链结构．近年来，借助凝集素芯片、多重质谱分析等糖蛋白组学和糖组学研究技术，发现不同来源CA125的O-糖链和N-糖链结构存在着明显的微观不均一性，以这些特征性糖链结构为标志物，可以显著提高CA125对卵巢癌的诊断特异性．在过去的10年，研究者们除对CA125糖链结构和糖基化模式做了深入的研究外，还利用糖组的研究方法，直接对来自卵巢癌患者血液、体液(腹水、囊泡液等)中糖蛋白的糖链做了精细的结构解析，结果显示，可有效鉴别卵巢癌患者和健康志愿者的特异性N-糖链结构，有可能成为灵敏度高和特异性好的卵巢癌生物标志物．卵巢癌生物标志物研究发展的总趋势是从传统的对蛋白质的定性和定量研究，逐步转向于对标志物糖基化修饰和特异性糖链结构的鉴定以及定量分析．本文从糖组学的视角，对卵巢癌标志物糖组学的研究现状及发展趋势进行了综述和展望． 相似文献
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