HEV ORF2重组菌菌种的稳定性及融合蛋白的应用

对HEVORF2 (HumanHepatitisEopenreadingframe)重组菌菌种进行稳定性研究并将其表达的融合蛋白用于酶标试剂。将重组菌种传 10 0代次 ,每隔 10代取样检测蛋白表达、质粒性状、遗传稳定性、染色特性、菌落形态及电镜检查。将其表达的融合蛋白经层析纯化用于酶标试剂中。经传代的各代菌体与菌种多项指标差异不显著 ,酶标试剂有敏感度及特异性 ,此菌种可作为表达融合蛋白ORF2 组装酶标试剂而长期使用。     

应用HPLC测定生物制品中甲醛含量的研究

研究了直接用于液相色谱测定甲醛与2,4-二硝基苯肼的反应条件,使反应在菌疫苗类生物制品自身的pH范围内即弱酸性条件下,无需酸碱度调节,反应产物甲醛衍生物不需要有机溶剂萃取,避免损失,可直接用于液相色谱分析。在检出限及精确度方面更是优越于分光光度法。将样品用2,4-二硝基苯肼溶液衍生后,经C18化学键合硅胶为固定相,以乙睛∶水(60∶40,体积比)为流动相。紫外检测波长360 nm进行测定。方法的平均回收率为95.4%(n=5),两种生物制品6次独立测定的相对标准偏差分别为重组乙型肝炎疫苗(CHO)RSD=0.92%,吸附白喉破伤风联合疫苗RSD=3.92%。甲醛(0.6~3.0μg/mL)范围内,浓度与吸收面积值呈良好的线性关系。结果显示,该研究方法的色谱条件能准确定量、灵敏、准确、重复性好,优于药典的分光光度法,可用于实际检测分析。