基于锁式探针技术快速检测玉米细菌性枯萎病菌和玉米内州萎蔫病菌

目的:建立一种检测玉米细菌性枯萎病菌和玉米内州萎蔫病菌的方法,为同时检测这2种检疫性细菌提供技术手段。方法:基于靶标序列设计2种检疫性细菌的锁式探针,与靶标菌进行连接消化反应,然后采用通用引物进行滚环扩增,其产物与偶联上对应捕获探针的微球进行杂交,最后通过液相悬浮芯片二重检测。结果:该检测方法能够有效地检测2种检疫性细菌,其检测阈值为103CFU/m L,具有良好的可重复性。结论:建立了一种快速、灵敏的玉米细菌性枯萎病菌和玉米内州萎蔫病菌的二重检测方法。     

腥黑粉菌属一新种

本文报道了从意大利进口兔尾草(Lagurus ovatus L.)上截获的腥黑粉菌属一新种——兔尾草腥黑粉菌(Tilletia laguri G.M.Zhang,G.X.Lin & J.R.Deng),同时讨论了该种与近似种的区别,文中对其形态特征有拉丁文和汉文描述,并附有图片。主模式标本保存在深圳动植物检疫局真菌标本室,等模式标本分别保存在德国蒂宾根大学范基黑粉菌标本馆(HUV)、中国科学院微生物研究所真菌标本室和华南农业大学植保系真菌标本室。     

检疫性疫霉DNA条形码标准分子构建

质粒标准分子是指含有外源基因和内源标准基因特异性片段的重组质粒分子。DNA条形码技术是通过对标准目的基因的DNA序列进行分析从而进行物种鉴定的技术。构建基于DNA条形码的质粒标准分子是DNA条形码技术应用于检测实践的要求。本研究将这两种检测鉴定技术相结合应用于检疫性疫霉的检测,构建了11种检疫性疫霉的DNA条形码标准分子,进行了测序验证、均匀性、稳定性和特异性验证。结果表明,构建的质粒标准分子准确度、均匀性、稳定性和特异性均良好,对实际口岸检验检疫工作具有实践应用价值。     

大豆猝死综合症病菌枝状镰孢的活性检测研究

应用来源于美国、阿根廷的我国对外检疫性有害生物大豆猝死综合症病菌枝状镰孢Fusarium virguliforme共8个菌株,分别在43℃至47℃ 5个温度梯度下水浴处理1min至5min 5个时间梯度,荧光染色后,经单细胞微量分析系统进行活性检测分析,设置传统萌发试验作为对照,结果表明:该病菌在47℃水浴处理4min即全部失活,SPSS统计分析得出该病菌的活性检测值与处理温度呈极显著负相关,而与处理时间(除菌株2-1和22825呈显著负相关外)均呈极显著负相关;所设置的孢子萌发率与处理温度和处理时间之间也呈极显著负相关;活性检测值与萌发率两者之间具有极显著的正相关性.本研究表明活性检测可以替代传统的孢子萌发方法,从而大幅度缩短该病菌活性检测时间,明显提高检测效率.     

小麦印度腥黑粉菌与近似种的形态学比较*

利用光学显微镜和扫描电镜对小麦印度腥黑粉菌及其近似种的形态学特征进行了系统研究。T. indica和T. horrida不同菌株冬孢子大小变化范围均较大。在所研究的种中,T. indica与T. walkeri最近似,前者冬孢子大小平均值比后者略大,分别为:38.35?5.92祄和32.86?1.53祄。T. indica与其它具有疣状或刺状突起的腥黑粉菌:T. horrida, T. barclayana, T. setariae, T. opaca, T. sumatii和T. savilei等区别明显,T. indica冬孢子大小平均值明显大于这些腥黑粉菌,前者大于30祄,后者则小于30祄, T. indica孢壁纹饰与这些腥黑粉菌也有一定区别。应用光学显微镜和扫描电镜,能将T. indica与除T. walkeri之外的其它近似种区别开,但在区别T. indica与T. walkeri方面则有一定的局限性。     

饲料原料中转基因成分的PCR检测

采用PCR检测方法从饲料的主要原料豆粕、玉米蛋白粉中成功地检出启动子35S (35S-promoter,originated from cauliflower mosaic virus)、终止子NOS (nopaline synthase-terminator,derived from Agrobacterium tumefaciens)、耐除草剂基因EPSPS(5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase)和抗虫基因CryIA（b）(delta-endotoxin,evolved from Bacillus thuringiensis subsp.kurstaki)等转基因成分,并通过扩增玉米自身蛋白基因Zein( a protein extracted from corn gluten)及大豆自身基因Lectin(chitin-binding protein)的引物和阴阳性对照、阴阳性质控,避免假阳性、假阴性结果。该方法已在口岸进口饲料原料转基因检测中得到初步应用。 Abstract:Based on the heterogenous genes usually used in transgenic crops,the PCR technique was performed with primers derived from CaMV 35S promoter(35S-promoter,originated from cauliflower mosaic virus),NOS terminator(nopaline synthase-terminator,derived from Agrobacterium tumefaciens),EPSPS(5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase) gene,and CryIA(b)(delta-endotoxin,evolved from Bacillus thuringiensis subsp.kurstaki)gene to detect transgenic agents from feed raw materials of soybean dregs and corn gluten meal,respectively.Endogenous corn Zein(a protein extracted from corn gluten) gene,soybean Lectin(chitin-binding protein) gene and negative,positive control were applied for avoiding false results.The method established here has been succeessfully applied in detecting transgenic elements in imported feed raw material.     

烟草环斑病毒IC-RT-Realtime PCR检测方法研究

本研究首次应用免疫捕捉反转录实时荧光PCR技术(IC-RT-RealtimePCR)检测烟草环斑病毒,由于综合运用了抗原抗体特异性结合、核酸分子杂交、高灵敏度实时荧光PCR技术的优点,从而使病毒检测在特异性、灵敏度、稳定性等技术指标上比传统的DAS-ELISA方法都有显著提高,解决了烟草环斑病毒检测工作中由于隐症、病毒浓度低、干扰物质存在而影响检测结果的问题。     

烟草环斑病毒IC-RT-Realtime PCR检测方法研究

本研究首次应用免疫捕捉反转录实时荧光PCR技术(IC-RT-Realtime PCR)检测烟草环斑病毒,由于综合运用了抗原抗体特异性结合、核酸分子杂交、高灵敏度实时荧光PCR技术的优点,从而使病毒检测在特异性、灵敏度、稳定性等技术指标上比传统的DAS-ELISA方法都有显著提高,解决了烟草环斑病毒检测工作中由于隐症、病毒浓度低、干扰物质存在而影响检测结果的问题.     

基于线粒体COI基因的桔小实蝇种群遗传分化研究

【目的】推测桔小实蝇Bactrocera dorsalis在中国的扩散路径和新发生地区的入侵来源。【方法】本研究测序获得来自中国、泰国、日本、老挝、孟加拉国和美国等地31个种群的192头桔小实蝇个体的COI序列（1 496 bp,占COI基因全长97.3%）,并以软件DnaSP 5.0, MEGA 6.0和Arlequin 3.5等完成各种群的遗传多样性、种群间的遗传分化以及单倍型分析。【结果】所测31个桔小实蝇种群总体表现出较高水平的核苷酸多样性（0.00663）和高水平的单倍型多样性（0.98069）。以F-统计法度量种群间遗传分化程度, 结果显示中国桔小实蝇地理种群间遗传分化较弱, 中国种群与泰国、日本、老挝、孟加拉国、美国种群间的遗传分化程度不同, 中国种群与美国种群及日本种群的遗传分化最大。而Mantel检验发现,中国、泰国、日本、老挝、孟加拉国和美国种群间的遗传分化与空间距离有关（R=0.670, P<0.0001）, 中国种群间的遗传分化不是地理隔离所造成的（R=0.038, P=0.534）。中国种群与泰国、日本、老挝、孟加拉国和美国种群间不存在共享单倍型。根据种群系统发育树,可将中国原发生地区种群划分为西南、东南两大分支。中性检验和错配分析结果均表明桔小实蝇曾存在大规模的扩张。【结论】桔小实蝇以东南地区和西南地区为源头向中国内陆扩散,其中广东、福建、广西和贵州种群为中国内陆种群较为有影响力的源头。根据遗传多样性、遗传分化、单倍型分析,推测新发生地区桔小实蝇的来源, 例如安徽合肥桔小实蝇种群主要来源于福建长乐、广东珠海和上海。     

腥黑粉菌属一新种

本文报道了从意大利进口兔尾草上截获的腥黑粉菌属一新种－兔尾草腥黑粉菌,同时讨论了该种与近似和的区别,文中对其形态特征有拉丁文和汉文描述,并附有图片。主模式标本保存在深圳动物检疫真菌标本室,等模式标本分别存在德国蒂宾根大学范基黑粉菌标本馆（ＨＵＶ）,中国科学院微生物研究所真菌标本室和华南农业大学植保系真菌标本室。