表达H9亚型禽流感流毒血凝素基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力

以RT－PCR法扩增获得H9亚型禽流感病毒（AIV）分离株（A／Chicken/China/F/1998)的血凝素（HA）基因,将其定向插入鸡痘病毒转移载体1175的痘苗病毒启动子P7．5的下游,得到重组转移载体1175HA,以脂质体转染法将1175HA转染至已感染鸡痘病毒282E4疫苗株（wt-FPV)的鸡胚成纤维细胞（CEF）中,通过在含X－gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化rFPV-HA,以间接免疫荧光法证实感染rFPV-HA的CEF表达了HA,rFPV-HA在免疫7日SPF鸡7天后即能诱生可检出的血凝抑制（HI）抗体,14天后诱生的HI抗体能达到高峰,且诱生的HI抗体保护较高水平达55天,在7日龄SPF鸡及含抗FPV母源抗体的商品鸡上进行了免疫效力试验表明,rPV-HV能显著抑制静脉攻毒后免疫鸡从泄殖腔的排毒,效果与AIV全病毒灭活苗相当。     

双重实时荧光PCR法检测食品和饲料中的鸡源性成分

根据鸡线粒体DNA细胞色素b基因序列和内参照基因PUC18质粒基因序列设计特异性引物和以不同荧光素标记的TaqMan探针。通过对反应条件的优化筛选,建立能同时扩增鸡源性成分和内参照基因成分的双重实时荧光PCR检测方法。设置内参照反应是为了监控反应体系中是否含有PCR反应的抑制物,避免出现假阴性结果。分别以鸡、鸭、鹅、火鸡、牛、羊、猪、鱼、兔、驴、鹿、狗、马、鸽子、大豆、玉米、小麦、大米、马铃薯及番茄的线粒体DNA作为模板进行特异性试验,结果表明该方法仅能特异性扩增鸡源性成分,而对其它物种未见有效扩增。通过灵敏度测试,该方法检出限达0.01%。所制定的方法特异性高,灵敏度好,可以作为食品和饲料中鸡源性成分的高效检测方法。     

共表达H9亚型禽流行性感冒病毒血凝素基因和鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力

为了构建更为安全有效的抗低致病性H9亚型禽流行性感冒（流感）的基因工程疫苗,将包含有H9亚型禽流感病毒分离株的血凝素（HA）基因、鸡Ⅱ型干扰素（IFN－Ⅱ）全长cDNA序列及调控其转录的鸡痘病毒早晚期启动子（PE／L）的基因片段,定向插入鸡痘病毒转移载体1175的痘苗病毒启动子P7．5的下游,得到HA和IFN－Ⅱ基因分别处于P7．5及PE／L转录调控下的重组转移载体1175HAIFN。以脂质体转染法将1175HAIFN转染至已感染鸡痘病毒282E4疫苗株（wt-FPV)的鸡胚成纤维细胞（CEF）中。1175HAIFN与wt-FPV基因组DNA之间的同源重组产生了重组鸡痘病毒rFPV-HA-IFN-Ⅱ。通过在含X-gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀获得并纯化rFPV-HA-IFN-Ⅱ。以间接免疫[荧光法和细胞病变抑制试验证实,纯化的rFPV-HA-IFN-Ⅱ感染的CEF能以非融合的方式同时表达HA和具有抗HSV活性的鸡IFN－Ⅱ。动物试验表明,rFPV-HA-IFN-Ⅱ能显著抑制静脉攻毒后1日龄SPF鸡及含抗FPV母源抗体的商品鸡从泄殖腔排毒,且能减轻单表达HA的重组鸡痘病毒（rFPV-HA)抑制日龄SPF雏鸡增重的副作用。     

我国部分地区H9亚型禽流感病毒血凝素基因序列比较与遗传发生关系分析

为从分子水平掌握我国H9亚型AIV的遗传变异情况和流行规律,本研究汇集近年来从我国12个省、市、自治区的发病鸡群中分离到的23株H9亚型禽流感病毒,通过RT-PCR方法和核苷酸序列测定获得了23个毒株的HA基因cDNA核苷酸序列。核苷酸和推导的氨基酸序列同源性比较结果表明,这些毒株HA基因的核苷酸序列同源性为94．1％～100％,氨基酸序列同源性为95．4％～100%;将这23个毒株和来自亚洲及世界其它地区的另外31株的HA基因cDNA序列同源性进行比较发现,分离自香港的HK170499株与日本的2个毒株关系较近;氨基酸序列分析发现,CKGS199、CKTJ196、CKTJ296、CKSH300和CKBJ197五个毒株各发生了一个潜在的糖基化位点的丢失。54株H9亚型AIVHA基因55bp～1152bp的氨基酸序列分析发现,裂解位点尽管有10种基序,但本研究中的23株和近年来从我国大陆和香港地区的分离的毒株则均为RSSR↓GLF;构成受体结合位点的191位氨基酸有一个规律,即所有中国大陆毒株与部分香港毒株都为N,其它毒株均为H,141aa～143aa处的糖基化位点有与191aa类似的规律,即：凡是191aa为N的毒株,该处均为NVS（CKBJ194除外）,凡是191aa为H的毒株,则该处均为NVT;遗传发生关系分析,中国大陆毒株处于欧亚谱系的第一支。本研究结果表明近年来我国鸡群中H9N2亚型禽流感病毒的感染流行可能有一个共同的来源,这为制定防治该亚型禽流感流行的有效对策提供了重要的科学依据。     

在疫苗免疫选择压力下H9N2亚型禽流行性感冒病毒HA基因的遗传变异

为了解H9N2亚型禽流行性感冒(流感)病毒在同亚型灭活疫苗的选择压力下的遗传变异情况,对某鸡场的感染鸡群进行连续4年的跟踪监测,对使用疫苗前和持续使用疫苗后不同时段分离到的H9N2亚型禽流感病毒的HA基因进行全序列分析.结果表明,在使用第一次分离的病毒株制备的疫苗后8个月分离到的病毒株,其HA基因仅发生一个氨基酸的差异;但在继续使用该疫苗的第二个和第三个年头分离的病毒株,它们的HA基因则一直在发生较大的变化.这一发现对进一步研究禽流感病毒在不断使用疫苗的选择压力下发生变异的规律,指导制定正确的禽流感防制对策具有重要意义.     

两株H9N2亚型禽流行性感冒病毒HA基因序列分析

禽流感(AI)是由A型流行性感冒(流感)病毒引起的一种严重危害禽类健康的传染性疾病.禽类感染禽流感病毒(AIV)后,症状可表现为非显性感染,亚临诊感染,或轻度呼吸道疾病,产蛋量降低,直至急性全身致死性疾病等多种形式.     

蕲蛇酶治疗冠心病心绞痛56例临床疗效观察

冠心病心绞痛属祖国医学的胸痹心痛范畴,随着人们物质、生活水平的提高和社会人口老龄化问题日益突出,冠心病的发病率亦有所上升.据我院的住院病人病种统计,冠心病已是中老年人的常见病之一.为探讨蕲蛇酶治疗冠心病心绞痛的临床疗效,我们对56例患者进行了疗效观察,现将结果报告如下.     

蕲蛇酶治疗冠心病心胶痛56例临床疗效观察

冠心病心绞痛属祖国医学的胸痹心痛范畴 ,随着人们物质、生活水平的提高和社会人口老龄化问题日益突出 ,冠心病的发病率亦有所上升。据我院的住院病人病种统计 ,冠心病已是中老年人的常见病之一。为探讨蕲蛇酶治疗冠心病心绞痛的临床疗效 ,我们对 56例患者进行了疗效观察 ,现将结果报告如下。1　临床资料1 .1　一般资料　 1 998年 1月至 1 999年 1 2月 ,在我院诊治的冠心病心绞痛患者中选择有胸闷不适或胸痛隐隐 ,甚至胸痛彻背者 ,心电图 ( ECG)检查有明显 ST段压低或 T波倒置 ;血液流变学 ,血脂全套检查 :选择血液粘度、纤维蛋白原、血…     

表达H9亚型禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力

以RTPCR法扩增获得H9亚型禽流感病毒(AIV)分离株(A/Chicken/China/F/1998)的血凝素(HA)基因,将其定向插入鸡痘病毒转移载体1175的痘苗病毒启动子P75的下游,得到重组转移载体1175HA。以脂质体转染法将1175HA转染至已感染鸡痘病毒282E4疫苗株(wtFPV)的鸡胚成纤维细胞(CEF)中,通过在含Xgal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化rFPVHA。以间接免疫荧光法证实感染rFPVHA的CEF表达了HA。rFPVHA在免疫7日龄SPF鸡7天后即能诱生可检出的血凝抑制(HI)抗体,14天后诱生的HI抗体到达高峰,且诱生的HI抗体保持较高水平达55天。在7日龄SPF鸡及含抗FPV母源抗体的商品鸡上进行的免疫效力试验表明,rFPVＨＶ能显著抑制静脉攻毒后免疫鸡从泄殖腔的排毒,效果与AIV全病毒灭活苗相当。