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1.
利用基因芯片技术筛选HIV-1F亚型基因限制性显示探针   总被引:2,自引:0,他引:2  
为筛选限制性显示技术制备的HIV 1F亚型基因探针 ,应用基因芯片打印仪将其有序地打印在玻片上制备基因芯片 .在随机引物延伸的过程中进行HIV样品的荧光标记 ,然后与芯片进行杂交 .杂交后清洗玻片并干燥 ,对芯片进行扫描 ,分析各探针的杂交信号 .从中筛选了 14个基因片段作为芯片下一步研究的探针 .实验证明 ,限制性显示技术是一种制备基因芯片探针的实用方法  相似文献   
2.
应用RD-PCR技术制备HIV基因芯片探针   总被引:14,自引:2,他引:12  
利用限制性显示 (RD PCR)技术快速分离HIV 1基因片段制备DNA芯片探针 .以Sau3AⅠ酶切HIV基因 ,得到许多大小适合芯片的限制性酶切片段 .然后在片段两端接上接头 ,根据酶切位点、接头的序列设计通用引物 .在该通用引物的 3′端分别延伸一个碱基后 ,通过引物间的两两组合 ,将PCR反应分成 10个亚组 .纯化各组PCR产物 ,克隆到T载体上 .阳性克隆经鉴定、扩大培养后提取质粒 .以质粒为模板扩增靶片段并进行序列分析 .每个亚型得到了十几个 10 0~ 10 0 0bp的HIV基因片段 .研究表明 ,RD PCR技术是一种有效的快速制备基因芯片探针的方法  相似文献   
3.
用限制性cDNA文库制作K562细胞基因表达谱芯片探针   总被引:1,自引:0,他引:1  
以人红白血病K562细胞为材料,应用限制性显示PCR(RD-PCR)技术构建cDNA文库,该文库通过PCR引物3′端延伸两个不同碱基形成136对引物对cDNA进行限制性扩增,得到136组不同的PCR扩增产物,纯化后与载体连接并转化细菌,即为限制性cDNA文库,根据不同的分组进行克隆的鉴定和分离。并进行大量扩增制备cDNA芯片探针,该方法构建的文库因经过了限制性分组扩增,每组均含有特定的cDNA,因而大大加快了随后克隆的分离 和鉴定的速度,为基因芯片探针制备提供了一个新方法。  相似文献   
4.
5.
乙烯在水稻结实过程中的作用(简报)   总被引:1,自引:0,他引:1  
水稻抽穗开花期剪去部分叶片后,谷粒的灌浆进程减缓,最终粒重降低,旗叶产生乙烯的速率增大,谷粒产生乙烯的速率降低且无明显的高峰出现;剪去穗上部分技校后,除谷粒产生乙烯速率有明显的高峰出现,且时间提前外,其谷粒灌浆进程。最终粒重和旗叶产生乙烯的速率均与剪去部分叶片的相反。  相似文献   
6.
采用金属螯合亲和层析法,纯化了小鼠腹水来源的抗乙肝核心抗原单克隆抗体,对上样缓冲液的pH和离子强度、洗脱液种类和洗脱方式进行优化。结果表明,采用降低pH分步洗脱时,最佳上样缓冲液为pH8.0,20mmol/LPB+0.5mol/LNaCl,抗体在pH5.0被洗脱下来,抗体回收率80%,纯度85%。采用咪唑浓度梯度洗脱时,最佳的上样缓冲液为pH8.0,20mmol/LPB+5mmol/L咪唑,抗体纯度大于95%,回收率65%;在上样缓冲液中不添加NaCl而添加少量的咪唑,更有利于抗体分离。以上洗脱方式都能较好地保持mAb的生物学活性,为该抗体的应用提供了必要的实验基础。  相似文献   
7.
提高木薯循环培养的次生体胚再生植株频率研究   总被引:4,自引:1,他引:3  
用木薯成熟体胚子叶作外植体诱导次生体胚,接种7d或15d后分别在诱导培养基或成熟培养基中加入AgNO3,可明显提高植株再生频率。前者可使体胚再生植株频率由对照的40.5%提高到58.1%;后者可使植株再生频率由对照的36.1%提高到61.3%。用ABA进行上述处理,效果更加显著。诱导期处理,可使植株再生频率由对照的40.5%提高到72.6%;成熟期处理,植株再生频率由对照的36.1%提高到81.3%。若诱导7d后,将2,4-D浓度由4.0mgL-1降至2.0mgL-1,并加AgNO3,继续诱导15d,转到附加0.25mgL-1ABA的成熟培养基中培养至30d,能极显著地促进体胚的发育和成熟,使植株再生频率达到一个相当高的水平,最高达95%,平均每个外植体产生的植株数达39.6个,分别相当于对照的2.38倍和2.46倍。  相似文献   
8.
基因表达谱芯片杂交影响因素的初步研究   总被引:6,自引:0,他引:6  
通过对K562细胞基因表达谱芯片杂交影响因素的研究表明,用限制性显示技术制备的cDNA探针长度较均一,适合基因芯片杂交;在42℃条件下含甲酰胺的杂交液中杂交16.20h,可保证样品的有效杂交。并表现出很好的杂交特异性;用RD-PCR或线性PCR对少量样品进行扩增,并用荧光(Cy3或Cy5)标记的通用引物对样品进行标记,可提高芯片检测的灵敏度;一次杂交反应总RNA的用量仅需0.5~10μg,在每cm^2约含1000~1500个点的阵列中杂交时,标记样品用量1~2μg为宜;用PCR产物纯化柱对荧光标记产物进行纯化,可大大减小背景荧光,提高信噪比;同一批芯片经同一样品杂交结果的重复性很好,相关系数高达97.8%  相似文献   
9.
一种限制性cDNA文库的构建   总被引:15,自引:2,他引:13  
祝骥  马文丽  李凌  姚汝华  郑文岭 《遗传》2002,24(2):174-176
利用本室创建的限制性显示技术RD-PCR,建立的cDNA文库,我们称之为限制性cDNA文库。该方法构建的文库因经过了限制性分组扩增,每组均含有特定的cDNA,因而大大加快了随后克隆的分离和鉴定的速度。 Abstract:A kind of cDNA library constructed according to Restriction Display PCR(RD-PCR) technology setup in our lab,which was called restriction cDNA library,was introduced in this paper.In the construction of cDNA library,cDNA was digested with restriction endonuclease,linked with special adaptor,amplified with PCR in groups.Each group of the restriction cDNA library contained special cDNAs.The method greatly reduced the repetitive frequency and accelerated the speed of identification.  相似文献   
10.
苦丁茶愈伤组织的诱导与褐变抑制   总被引:5,自引:0,他引:5  
以叶片为材料,对苦丁茶愈伤组织的诱导,继代培养及褐变调控的研究表明:(1)苦丁茶愈伤组织的诱导及继代培养均以MS附加BA 2.0mgL^-1和NAA 4.0mgL^-1的培养基效果最好;(2)0.1%的植酸可明显促进愈伤组织生长、抑制褐变,而硫代硫酸钠效果最差;(3)连续培养40-50d愈伤组织增长倍数达到最大值;(4)继代27次以后愈伤组织生长速度开始下降。这些条件为下一步细胞培养生产苦丁茶甙等  相似文献   
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