肝癌细胞分泌蛋白质的多种提取方法比较

由于分泌蛋白在重大生理和病理过程中的重要角色和功能, 使得分泌蛋白质组的研究备受人们关注. 高效提取分泌蛋白质是分泌蛋白质组学研究的第一步, 也是关键的一步. 本研究首次比较了3种常用的提取方法: 超滤法、沉淀法和透析法. 以具有高自发性转移潜能的人肝癌细胞系LM3为研究对象, 采用3种方法平行提取分泌蛋白, 发现超滤法的提取效率最高; 蛋白质经过溶液酶解, 在线的一维反相高效液相色谱分离和ESI-MS/MS质谱鉴定, 共鉴定了360个非冗余蛋白, 其中有34, 110和29个蛋白分别只在超滤法、沉淀法和透析法提取的样品中被鉴定到, 沉淀法占优势, 3种方法互相补充. 360个蛋白中, 有42个分泌蛋白为首次被鉴定到, 扩大了已有的人肝癌转移细胞分泌蛋白数据库.     

肝癌转移相关的核心岩藻糖基化 蛋白质表达谱的研究

通过比较研究不同转移潜能肝癌细胞系中核心岩藻糖基化蛋白质表达谱的差别,筛查与转移相关的重要糖蛋白 . 用 SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 、双向电泳 (2-DE) 和凝集素印迹技术联合基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱 (MALDI-TOF-MS/MS) 分析,建立 3 种不同转移潜能人肝癌细胞系 Hep3B 、 MHCC97L 和 MHCC97H 的核心岩藻糖基化蛋白质表达图谱 . 比较研究发现,不同转移潜能肝癌细胞呈现不同的 SDS-PAGE/LCA 凝集素印迹图谱, MHCC-97H 和 MHCC-97L 在 35~45 ku 和 45~60 ku 间出现了 Hep3B 未见的条带 . 在核心岩藻糖基化蛋白质表达图谱中, Hep3B、 MHCC97L 和 MHCC97H 分别平均检测到 (55±7) 个蛋白质点 (n=3), (60±6) 个蛋白质点 (n=3), (61±4) 个蛋白质点 (n=3);以各自双向电泳图谱为参考胶,Hep3B、 MHCC97L 和 MHCC97H 分别与其匹配的平均匹配点数为 (25±3) 个 (n=3), (30±4) 个 (n=3), (28±3) 个 (n=3). 该图谱中,与 Hep3B 相比, MHCC97L 有 13 个点未匹配,其中 9 个点为 Hep3B( － )/MHCC97L(+); MHCC97H 有 9 个点未匹配,其中 6 个点为 Hep3B( － )/MHCC97H(+), MALDI-TOF-MS/MS 可鉴定出 Annexin1、 Keratin 8 等 12 种差异蛋白质 . 这些结果证实了不同转移潜能的肝癌细胞有明显的核心岩藻基化糖蛋白差异性表达 . 提示肝癌转移可能与这些差异糖蛋白及其核心岩藻糖基化有关 .