新疆3种雅罗鱼线粒体DNA控制区序列的差异和系统进化关系

对分布在新疆的准噶尔雅罗鱼(Leuciscus merzbacheri)、贝加尔雅罗鱼(Leuciscus leuciscus baicalensis)和高体雅罗鱼(Leuciscus idus)3个鱼种共24尾个体的线粒体DNA D-loop控制区核苷酸序列进行了测定,获得24条长度为667—669bp的同源基因序列。3种雅罗鱼之间的序列差异在6．39％—9．89％之间,贝加尔雅罗鱼与高体雅罗鱼种间序列同源性高,变异程度小;贝加尔雅罗鱼与准噶尔雅罗鱼种间序列同源性最低,变异程度最大。所采集的贝加尔雅罗鱼两个地理群体(赛里木湖和额尔齐斯河)内mtDNA的平均核苷酸碱基序列差异为1．07％和1．08％;两群体间的序列差异为1．07％,显示两个地理群体间无明显分化。DNA序列数据显示,这3种鱼类线粒体DNAD-loop序列变异丰富,24尾个体呈现独自的单倍型。同源基因序列平均含AT碱基64．1％,GC碱基35．9％,显示准噶尔雅罗鱼、贝加尔雅罗鱼、高体雅罗鱼的线粒体DNAD-loop区核苷酸组成的不均一性。分子系统树提示,贝加尔雅罗鱼与高体雅罗鱼亲缘关系较近,准噶尔雅罗鱼是3种雅罗鱼中较古老的鱼种。     

新疆3种雅罗鱼线粒体DNA细胞色素b序列的差异与系统进化

利用鲤科鱼类线粒体DNA细胞色素b通用引物对分布在新疆的准噶尔雅罗鱼(Leuciscusmerzbacheri)、贝加尔雅罗鱼(L .baicalensis)和高体雅罗鱼(L .idus) 3个鱼种共1 5尾个体的线粒体DNACytb部分核苷酸序列进行了测定,获得1 5条长度为41 3bp的同源基因序列。同源基因序列分析显示,在3种雅罗鱼1 5条mtDNACytb基因片段中,A、T、C、G碱基的平均含量分别是:2 7 4%、2 6 7%、1 7 2 %、2 8 7% ,其中A T含量(5 4 1 % )高于G C含量(4 5 9% ) ;共检测到5 2个突变位点;转换比颠换发生频率高,转换颠换比值(R)是3 5。mtDNACytb的进化速率在3种雅罗鱼间表现出不一致性,贝加尔与高体雅罗鱼、贝加尔与准噶尔雅罗鱼种间遗传距离分别是0 1 2 5 1和0 1 2 61 ,保守性较低;高体与准噶尔雅罗鱼种间的遗传距离是0 0 0 0 7,高度保守。mtDNACytb分子系统树显示,在3种雅罗鱼中贝加尔雅罗鱼独立成一枝,高体雅罗鱼和准噶尔雅罗鱼聚成一类。提示了,在mtDNACytb分子水平上,高体雅罗鱼和准噶尔雅罗鱼的亲缘关系十分相近,贝加尔雅罗鱼与准噶尔雅罗鱼的亲缘关系相距较远。我们对准噶尔、贝加尔和高体雅罗鱼mtDNACytb方面的研究与陈星玉对其骨骼类型的研究结果相吻合。     

γ射线辐照嘧啶核苷水溶液的电子自旋共振（ESR）研究

亚硝基特丁烷（ＭＮＲ）为捕集剂,利用自旋捕集技术,对γ射线辐照嘧啶苷水溶液进行了ＥＳＲ研究,确定了胸苷、尿苷和胞苷可产生的自肇捕集自由基的类别,并讨论了自由基形成的机制。     

新疆军垦型细毛羊基因组BAC文库的构建

选用新疆军垦型细毛羊为材料,.构建了含有190 464个克隆的BAC文库,文库平均插入片段大小为133 kb,同时文库92.5%的克隆插入片段大于100 kb,而且有部分克隆甚至大于300 kb,这将满足大多数基因筛选的要求.假定绵羊的基因组含有3x106 kb,根据文库的平均插入片段大小,计算的文库基因组覆盖率为8倍.因此,从文库筛选到目的片段的概率为98.2%.由于该文库中插入的外源片段来自新疆军垦型细毛羊的基因组,这对于研究新疆军垦型细毛羊的特殊性状的基因与其他绵羊品种和物种之间的差异,及构建其全基因组物理图谱和基因图谱地完善是非常有利的.     

新疆细毛羊2倍基因组BAC文库PCR筛选系统的构建与使用

本研究所构建的BAC文库覆盖了8倍新疆细毛羊的基因组,平均插入片段的大小为133kb,同时文库92．5%的克隆插入片段大于100kb,而且有部分克隆甚至大于300kb,假定绵羊的基因组含有3×10~6kb,根据文库的平均插入片段大小为133kb,从文库筛选到目的片段的概率为98．208%。为了验证文库有较好的覆盖率,构建了2倍基因组文库PCR筛选系统,并对位于新疆细毛羊20号染色体MHC基因邻近区段的DMB_EX2、MCMA36、CP73和BM1258 4个分子标记进行了筛选,得到的平均阳性克隆数为1．5个,从筛选结果来看,这与文库插入片段估计的8倍基因组覆盖率相当接近并且没有偏向,这使得本文库成为研究绵羊的功能基因、位置克隆和完善基因组物理图谱的极为有用的资源。     

超氧自由基与嘧啶碱基及其核苷反应的ESR研究

用自旋捕集技术和ＥＳＲ方法,以ＭＮＰ为捕集剂,研究了紫外线辐照核黄素产生超氧自由基等活性氧与嘧啶碱基及其核苷的反应,确定了尿嘧啶,胞嘧啶和胸腺嘧啶及其核苷所产生的自旋加合物自由基的类别,讨论了自由基的形成机制,揭示了超氧自由基与嘧啶碱基及其核苷的反应是不是直接进行的,而是通过羟基自由基来实现的。     

两种获取鱼类线粒体DNA的方法比较

直接从鱼类组织提取线粒体DNA和先提取基因组DNA再用相应引物PCR扩增所需mtDNA某一区域序列片段是获取鱼类mtDNA切实可行的两种方法。对这两种方法在使用过程中的注意事项、各自的优缺点及应用范围进行了较为细致的比较,为更好地利用mtDNA这一重要分子标记研究鱼类mtDNA的遗传多态提供参考。     

新疆三种雅罗鱼属鱼类mtDNA D-loop多态性及起源分化分析

用PCR-RFLP技术,对新疆分布的准噶尔雅罗鱼、贝加尔雅罗鱼和高体雅罗鱼的mtDNA D-loop高变区约827bp进行了扩增,用ScaI、HinfI、AluI、DdeI 4种限制性内切核酸酶对56个样本的扩增产物酶切和RFLP分析,共检测到6种单倍型。准噶尔雅罗鱼存在2种单倍型：BDAA和BDBA;贝加尔雅罗鱼存在3种：AAAA、ABAA和ACAA;高体雅罗鱼只有1种。初步认为,准噶尔雅罗鱼、贝加尔雅罗鱼存在较丰富的群体内变异。用6种单倍型及净遗传距离绘制的UPGMA分子系统树,提示准噶尔雅罗鱼有可能是原始种,贝加尔雅罗鱼和高体雅罗鱼是由准噶尔雅罗鱼进化而来。 Abstract:PCR-RFLP technique was employed to amplify about 827bp of mtDNA D-loop hypervariable region of Leuciscus baicalensis,L.merzbacheri and L.idus in Xinjiang.The PCR products of 56 samples with four restriction enzymes were digested:ScaI,HinfI,AluI,DdeI,and RFLP analysis was done then.The study indicates that all of L. species and populations have six haplotypes,L.merzbacheri has two haplotypes:BDAA,BDBA;L.baicalensis has three:AAAA,ABAA,ACAA;L.idus has one:CAAA.It is primarily considered that L.merzbacheri and L.baicalensis have more intra-population mutations.The UPGMA trees with 6 haplotypes and net genetics distance pointed out that L.merzbacheri might be original species,L.baicalensis and L.idus are evolved from L.merzbacheri.