与顶体反应相关的抗人精子单克隆抗体及其抗原的特性 Ⅱ单克隆抗体对精子功能的影响以及抗原定位与免疫印迹

精子只有经过获能和顶体反应,才能与卵融合。本文对以体外诱导的顶体反应人精子作为免疫原制备的23个单克隆抗体进行了一系列鉴定,结果表明:所得单克隆抗体的间接免疫荧光染色,主要定位在人精子的赤道板和中段,没有发现定位于顶体及顶体后的单克隆抗体。某些单克隆抗体的间接免疫荧光染色部位在顶体反应后发生了改变。有18个单克隆抗体显示程度不同的精子凝集作用,未发现有精子制动作用的单克隆抗体。免疫印迹证实,有9个单克隆抗体的靶抗原是蛋白质类物质。     

与顶体反应相关的抗人精子单克隆抗体及其抗原的特性 Ⅰ顶体反应的诱导及抗顶体反应精子的单克隆抗体的制备

精子必须经过获能和顶体反应(AR)才具受精能力。利用获能和AR 前后精子细胞内和精子表面大分子的变化,可探索新的避孕办法和男性不育诊断及治疗的新途径。本文将正常人精子于体外在BWW-BSA 培养基中获能,用钙离子载体A 23187诱导人精子进行AR(以三重染色和金霉素荧光染色两种方法检测这些精子的AR 率为50%左右),然后用这些新鲜的人精子作为免疫原,制备了23个抗人精子单克隆抗体,其中21个为IgM,2个分别为IgG_1和IgG_2。根据23个单克隆抗体与经获能和AR 处理的精子以及未处理精子的不同免疫反应,将它们分为A(AR 精子反应组)、B(未处理精子反应组)和C(双重精子反应组)三组,并测定了这些单克隆抗体与人的某些白血病细胞系的交叉反应。     

抗小鼠精子特有乳酸脱氢酶C4的与分泌片装配或未装配的单克隆抗体IgA的生物学功能

为了测定抗精子ＩｇＡ在免疫不育和抗精子避孕疫苗研制方面的生物学作用,用肠道内免疫的方法制备了一组抗乳酸脱氢酶Ｃ４（ＬＤＨ－Ｃ４）的单克隆ＩｇＡ抗体（ｍｏＩｇＡ）。以免疫印迹证实了它们的异质同形体。大部分ｍｏＩｇＡ（ＰＡ１－ＰＡ５）是用肠道内免疫和以派依尔氏淋巴细胞作为亲本细胞进行融合来获得的。在豚鼠血清补体存在的情况下,小鼠精子可以被ｍｏＩｇＡＰＡ１、ＰＡ２和ＰＡ４所制动。高浓度ＰＡ４和ＰＡ５可凝集小鼠精子。小鼠体外受精率可被３个ｍｏＩｇＡ（ＰＡ２、ＰＡ３和ＰＡ４）显著降低,但用ＰＡ１、ＰＡ２和ＰＡ５被动免疫之后,小鼠体内受精无明显变化。纯化的小鼠胆汁分泌片可同纯化的ｍｏＩｇＡ或腹水中的ｍｏＩｇＡ在体外组装起来。同分泌片结合之后,ｍｏＩｇＡ对精子的制动、凝集和体外受精无明显变化。这些研究结果提供了抗ＬＤＨ－Ｃ４的ｍｏＩｇＡ和分泌性ＩｇＡ对精子功能和体外受精的生物学作用的直接证据,在免疫不育的防治,避孕疫苗的研制以及性传播疾病的防治方面均有一定的指导意义。     

树鼩(Tupaia belangeri)淋巴细胞的自体花结

参与人自体花结(A花结)形成的分子(如CD2/LFA-3),与免疫细胞的粘附和激活有关。我们曾发现,人和猴淋巴细胞表面的树鼩红细胞(TRBC)受体不同于绵羊红细胞(SRBC)受体(CD2),可能是一种新的白细胞分化抗原。花结试验表明,树鼩的外周血淋巴细胞(TPBL)和胸腺细胞都能形成A花结,结花率分别为20.9％和11.1％;而绵羊红细胞花结(E花结)形成率分别是20.9％和1.1％。以四种单克隆抗体(McAb)(Leu 5,0-275,AICD2.1和E2 McAb)进行树鼩A花结和E花结的抑制与抗原调变试验,结果表明,这些抗体对树鼩的A花结都没有明显的抑制或调变作用,但对E花结的抑制及调变作用明显。说明TPBL表面的TRBC受体不同于SRBC受体,与CD2/LFA-3及E2分子无关。因此,TPBL的A花结与E花结形成机制不同。     

抗小鼠精子特有乳酸脱氢酶C4的与分泌片装配或未装单克隆抗体IgA的生物学功能

为了测定抗精子IgA在免疫不育和抗精子避孕疫苗研制方面的生物学作用，用肠道内免疫的方法制备了一组抗乳酸脱氢酶C4(LDH-C4)的单克隆IgA抗体(moIgA)。以免疫印迹证实了它们的异质同形体。大部分moIgA(PA1-PA5)是用肠道内免疫和以派依尔氏淋巴细胞作为亲本细胞进行融合来获得的。在豚鼠血清补体存在的情况下，小鼠精子可以被moIgA PA1、PA2和PA4所制动。高浓度PA4和PA5可凝集小鼠精子。小鼠体外受精率可被3个moIgA(PA2、PA3和PA4)显著降低，但用PA1、PA2和PA5被动免疫之后，小鼠体内受精无明显变化。纯化的小鼠胆汁分泌片可同纯化的moIgA或腹水中的moIgA在体外组装起来。同分泌片结合之后，moIgA对精子的制动、凝集和体外受精无明显变化。这些研究结果提供了抗LDH-C4的moIgA和分泌性IgA对精子功能和体外受精的生物学作用的直接证据，在免疫不育的防治，避孕疫苗的研制以及性传播疾病的防治方面均有一定的指导意义。