转基因抗虫作物对捕食性瓢虫的安全性研究进展

转基因抗虫作物的商业化种植带来了显著的经济、生态和社会效益,对转基因抗虫作物的安全性评价也一直是国内外学者研究的热点。对生物非靶标效应的研究是转基因抗虫作物安全性评价的重要组成部分,农田天敌类生物是其中的重点内容之一。瓢虫是农田生态系统重要的捕食性天敌,评价其在转基因抗虫作物田间是否能通过捕食猎物或取食花粉而接触到杀虫蛋白并富集于体内,进而对自身产生一定的非靶标效应,这对捕食性瓢虫的安全性研究具有重要的意义。本文从捕食性天敌瓢虫的生命表参数、行为功能参数、田间群落参数及体内微环境指标等方面综述了转基因抗虫作物对瓢虫的安全性研究进展,并对后期转基因抗虫作物对田间捕食性天敌的研究方向提出了建议,以期为转基因抗虫作物的环境安全性研究提供理论指导和为进一步完善转基因抗虫作物对瓢虫安全性评价的技术体系提供系统的数据资料。     

艾拉莫德联合沙利度胺对强直性脊柱炎患者免疫球蛋白及ESR、C3、C4的影响

摘要 目的：探讨艾拉莫德联合沙利度胺对强直性脊柱炎患者免疫球蛋白及血沉（ESR）、补体C3（C3）、补体C4（C4）的影响。方法：选择2016年11月到2019年12月在我院接受治疗的149例强直性脊柱炎患者,采用随机数表法分为联合组（n=75）和单药组（n=74）。单药组给予沙利度胺治疗,联合组在单药组的基础上给予艾拉莫德治疗。比较两组临床疗效、免疫球蛋白、ESR、C3、C4、肿瘤坏死因子（TNF-α）、C反应蛋白（CRP）、临床症状情况及不良反应发生情况。结果：治疗后,两组总有效率比较差异显著（P<0.05）;与治疗前比较,联合组和单药组免疫球蛋白水平检验结果比较无显著差异;治疗后,联合组和单药组IgA、IgG及IgM水平均随着时间的推移而下降,且联合组低于单药组,差异显著（P<0.05）;与治疗前比较,联合组和单药组ESR、C3、C4水平检验结果比较无显著差异;治疗后,联合组和单药组ESR、C3及C4水平均随着时间的推移而下降,且联合组低于单药组,差异显著（P<0.05）;与治疗前比较,联合组和单药组炎症因子水平检验结果比较无显著差异;治疗后,联合组和单药组TNF-α、CRP水平均随着时间的推移而下降,且联合组低于单药组,差异显著（P<0.05）;与治疗前比较,联合组和单药组临床症状比较无显著差异;治疗后,联合组和单药组关节肿胀、晨僵时间均随着时间的推移而下降,且联合组低于单药组,差异显著（P<0.05）;联合组与单药组患者不良反应总发生率相比,差异无统计学意义（P>0.05）。结论：在强直性脊柱炎患者中应用艾拉莫德联合沙利度胺效果显著,可有效改善患者免疫球蛋白及ESR、C3、C4水平,且不增加不良反应。     

二化螟钙黏蛋白CAD1的原核表达及与Cry1Ac、Cry2Aa蛋白的结合

【目的】二化螟是水稻的重要害虫之一,钙黏蛋白(cadherin,CAD)是一类重要的Bt杀虫蛋白受体,在获得二化螟钙黏蛋白基因(Cs CAD1)的基础上,明确Cs CAD1蛋白与Cry1Ac和Cry2Aa蛋白的结合能力。【方法】利用PCR技术克隆Cs CAD1基因片段,将构建的p ET-28a-(+)-Cs CAD1重组质粒转入原核表达菌株BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。目的蛋白经Ni柱亲和纯化后SDS-PAGE电泳检测,利用western blot和ligand blot技术分析其与Cry1Ac和Cry2Aa蛋白的结合能力。【结果】重组载体可在表达菌株BL21中表达一个约44 ku的蛋白,原核表达载体构建成功。SDS-PAGE显示该蛋白条带单一,且纯度较好。Ni柱亲和层析纯化该目的蛋白后进行Ligand blot分析,结果显示Cs CAD1重组蛋白可以与Cry1Ac和Cry2Aa蛋白结合。【结论】Cs CAD1蛋白可以与Cry1Ac和Cry2Aa蛋白结合,是潜在的Cry蛋白受体,所得结果有助于阐明Cry1Ac和Cry2Aa蛋白对二化螟的作用机制。     

二化螟APN1的原核表达及其与Cry2Aa蛋白的结合特性研究

【目的】Bt杀虫蛋白发挥杀虫活性的重要前提是Cry蛋白能够与昆虫中肠上皮细胞刷状缘膜囊(BBMVs)上的受体蛋白结合。在前期获得二化螟氨肽酶N1(Aminopeptidase N,APN1)基因全长序列的基础上,明确二化螟APN1多肽片段与Cry2Aa的结合能力。【方法】将二化螟APN1序列片段在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,利用蛋白质单向电泳和ligand blotting技术分析二化螟APN1多肽片段与Cry2Aa的结合能力。【结果】重组载体可在表达菌株BL21(DE3)中表达一个约70 ku的蛋白,纯化后的多肽条带单一,纯度较好。Ligand blot分析结果显示,表达的二化螟APN1多肽片段可以与活化的Cry2Aa杀虫蛋白结合,且结合条带随着重组蛋白上样量的降低而减弱。【结论】APN1多肽片段可以与Cry2Aa结合,为阐明APN1基因的功能奠定基础,也为其他Bt蛋白的受体蛋白相关研究提供新的借鉴。