双重实时荧光PCR法检测食品和饲料中的鸡源性成分

根据鸡线粒体DNA细胞色素b基因序列和内参照基因PUC18质粒基因序列设计特异性引物和以不同荧光素标记的TaqMan探针。通过对反应条件的优化筛选,建立能同时扩增鸡源性成分和内参照基因成分的双重实时荧光PCR检测方法。设置内参照反应是为了监控反应体系中是否含有PCR反应的抑制物,避免出现假阴性结果。分别以鸡、鸭、鹅、火鸡、牛、羊、猪、鱼、兔、驴、鹿、狗、马、鸽子、大豆、玉米、小麦、大米、马铃薯及番茄的线粒体DNA作为模板进行特异性试验,结果表明该方法仅能特异性扩增鸡源性成分,而对其它物种未见有效扩增。通过灵敏度测试,该方法检出限达0.01%。所制定的方法特异性高,灵敏度好,可以作为食品和饲料中鸡源性成分的高效检测方法。     

pcD-awte候选疟疾DNA疫苗制备及其质量相关性分析

本实验室构建的疟疾DNA疫苗经动物试验表明具有很好的免疫原性,为申请临床试验,进行了制备工艺的研究。本研究将含pcD-awte质粒的大肠杆菌DH5α在发酵罐中发酵培养,碱裂解法粗提质粒,再依次通过Sepharose 6FF分子筛层析、Plasmidselect 亲硫吸附层析和Source 30Q离子交换层析精制获得质粒纯品,并对纯品进行质量分析。结果每升培养液可获得质粒纯品43.9mg,质量符合Ferreira等推荐的药用标准。     

peD—awte候选疟疾DNA疫苗发酵条件的探索

探索pcD—awte候选疟疾DNA疫苗发酵条件,为该疫苗制备工艺的建立做准备。通过摇瓶和5L发酵罐水平,考察不同培养基组成及来源、补料变化和温度转换对工程菌生长及质粒产量的影响。结果表明在TB培养基组分中添加Mg^2＋、微量元素复合物、核苷等成分,补料培养基由葡萄糖代替甘油,对数中期温度由37％升至42℃等条件,能提高工程菌株pcD—awte质粒的产量。在优化的培养条件下pcD—awte质粒产量可达125—130mg／L培养液。     

pcD-awte候选疟疾DNA疫苗发酵条件的探索

探索pcD-awte候选疟疾DNA疫苗发酵条件,为该疫苗制备工艺的建立做准备.通过摇瓶和5 L发酵罐水平,考察不同培养基组成及来源、补料变化和温度转换对工程菌生长及质粒产量的影响.结果表明在TB培养基组分中添加Mg2+、微量元素复合物、核苷等成分,补料培养基由葡萄糖代替甘油,对数中期温度由37℃升至42℃等条件,能提高工程菌株pcD-awte质粒的产量.在优化的培养条件下pcD-awte质粒产量可达125～130mg/L培养液.