哺乳动物中基因持续表达的策略

人类遗传病的治疗越来越依赖于基因水平上的治疗,但外源基因不能在哺乳动物中持续表达的缺陷严重阻碍了这一手段的快速发展。含有转座子载体的染色体基因组整合,裸露质粒DNA转化到肝脏的压力输送,或是在质粒载体中插入真核基因的顺式作用元件如内含子、3’端非翻译区、EBV序列等,都可以在一定程度上赋于外源基因以长期持续的表达,这些策略对于基因治疗的发展具有重要的意义。 Abstract: Gene therapy holds great promises to a variety of inherited diseases. However, the limitations on extended and consistent foreign gene expression has severely hampered the development of applicable gene therapy approaches. Technologies are reviewed here including transponson integration, biolistic measures that pulse the naked plasmid into living organs, or the integration of eukaryotic cis elements into introns, 3′ untranslated regions, or the integration of the EBV sequences, which could assist in the prolonged gene expression of the introduced foreign genes. These strategies may significantly promote the progresses of gene therapy.     

敲减DTX4表达抑制C2C12细胞成肌分化

DTX4（Deltex 4 homolog）蛋白属于Deltex家族成员|Deltex家族是Notch信号通路的调节因子. 已知Notch信号通路在成肌分化中发挥重要作用. 然而,DTX4是否参与调控肌肉发育尚未有报道. 本研究探索DTX4对成肌分化的影响及作用机制. 实时定量PCR和蛋白质印迹分析揭示,伴随小鼠C2C12成肌细胞（myoblast）分化为肌管（myotube）过程,成肌分化标志蛋白肌球蛋白重链（myosin heavy-chain,MyHC）、肌细胞生成素(myogenin)表达逐渐升高,DTX4 mRNA及蛋白质表达水平也逐渐升高. 通过顺序专一的siRNA敲减DTX4表达后,C2C12成肌细胞肌管面积和肌管融合指数明显减少|MyHC、肌细胞生成素蛋白表达水平明显降低|但ERK信号通路未见明显变化.上述结果表明,敲减DTX4表达抑制C2C12细胞成肌分化.我们的结果提示,DTX4可能参与C2C12细胞成肌分化.     

hGH消化道途径转基因的研究

消化道途径转基因过程方便、快捷、易适应,可为基因治疗提供全新的模式。为了研究人 生长激素(bGH)基因的经消化道途径转基因过程,实验首先应用ECHO克隆系统。在供载体 pUni-hGH和宿主载体pcDNA4／TO-E的基础上,构建出hGH的哺乳动物表达载体pcDNA4-hGH;然 后结合酿酒酵母表达载体pESC-URA,构建出hGH的酵母-哺乳动物穿梭栽体pESC-CMV-hGH,测 序鉴定后转化酿酒酵母。用阳性重组酵母对小鼠进行灌胃免疫实验,间接ELISA方法在实验组 小鼠的血清中检测到抗hGH抗体的存在。结果证实hGH基因可通过消化道途径转进小鼠体细 胞并进行表达,初步证明了hGH的消化道基因治疗的可行性。     

镜像克隆系统:DNA重组技术的新进展

镜像克隆系统是近几年新发展起来的一种DNA重组技术,它突破了传统重组限制酶切及连接的繁琐和费时,利用重组酶使外源基因快速、方便地进行亚克隆和表达。本阐述了镜像克隆系统的结构、作用原理及特点。     

一种新的DNA重组系统

通路克隆系统(Gateway Cloning System)是一种位点特异的DNA重组新技术,具有载体问DNA片段相互转化灵活、操作简单、重组反应高效快捷等优点。本文介绍了该系统的原理、结构及特点。     

通路克隆系统:DNA重组技术的新进展

近几年新发展了一种载体间DNA片段相互灵活转化的多功能系统 ,即通路克隆系统(gatewaycloningsystem)。它是一种位点特异的DNA重组技术 ,包括PCR产物的定向克隆 ,DNA片断高效、广泛的亚克隆 ,氨基或羧基末端的融合蛋白表达等。重点阐述了该系统的作用原理、特点及其应用。