高速PCR用DNA聚合酶

ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术自创始至今还不到１５年的时间 ,但它已以惊人的速度渗透到了工业、农业、医学、药学等各个领域〔１ ,２〕。ＰＣＲ技术的发明无疑给生物工程带来了历史性的转折 ,促进了生物工程 ,特别是基因工程研究的飞速发展〔３〕。近期 ,随着人类基因组计划等的实施 ,并伴随着生物芯片技术的推广 ,快速、高效的ＰＣＲ已成为ＰＣＲ技术发展的必然趋势。ＴａＫａＲａ推出的Ｚ ＴａｑＤＮＡ聚合酶（Ｚ是指Ａ、Ｂ……排列的最后一个字母 ,指最快的意思 ,为商品名）是为快速ＰＣＲ而研制成功…     

一种高效的功能基因分离解析法

人类基因组计划（Human Genome Project）的实施揭开了各种生物基因组解析的序幕［1~3］。随着各种生物的基因组解析的顺利进行,遗传基因的功能研究以及寻找新的功能基因变得越来越重要。本文介绍的MegacloneTM技术、MegasortTM技术［4］以及MPSS技术［5］可以高效地分离解析各种功能基因。 Abstract:The implementation of the Human Genome Project preludes the analyzing of biologic genomes［1~3］.Following the successful analysis of diverse biologic genomes,it becomes more and more important to research the functions of genes and to find new functional genes.In this article,we use the techniques of MegacloneTM,MegasortTM［4］ and MPSS［5］ to sort and sequence effectively different functional genes.     

微量RNA的cDNA PCR文库的构建

使用PCR（polymerase chain reaction)技术,调制了mRNA的cDNA PCR文库,实验证明,cDNA PCR文库能使原cDNA的量放大数百倍,同时,使用人体K562培养细胞的总RNA,对cDNA PCR文库法和反转录中的β-Actin的cDNA量进行了比较,cDNA PCR文库法中的β-Actin的cDNA量大于高于反转录中的β-Actin的cDNA量,使用75pg的人体K562培养细胞的总RNA,调制成50ul的CDNA PCR文库,使用1ul的CDNA PCR文库进行了PCR反应时,可对文库中β-Actin的CDNA进行PCR检测,因此,CDNA PCR文库显示了良好的信息放大性能。     

快速高效的DNA连接

DNA片段的连接在基因操作过程中应用广泛。通常情况下利用T4DNALigase必须经过长达16小时才能完成连接反应,而且反应常常受到DNA末端结构等的影响。宝生物工程（大连）有限公司（TaKaRa）的DNA连接系统（TaKaRaDNALigationKitVer。2）由于其独特的反应液体系,可以将反应时间缩短至半个小时,且不受DNA结构等的影响,大大地节省了反应时间,方便了实验操作。此外,在使用本试剂盒时,由于只需简单地向DNA溶液中加入一种溶液,可以在极小的反应体积下,短时间内高效地完成各种形式的DNA连接（图1、2）。并且反应液可以直接用…     

超高忠实性PCR用DNA聚合酶

ＰＣＲ（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ）法已在生物工程领域得到了广泛的应用,而ＰＣＲ法的推广完全得益于Ｔａｑ耐热性ＤＮＡ聚合酶。近年来,ＰＣＲ法的应用除生物工程领域外,已应用至工业、农业、医学、制药等与人们生活息息相关的各个领域。随着ＰＣＲ法的不断推广,人们对ＤＮＡ聚合酶的忠实性（Ｆｉｄｅｌｉｔｙ）要求越来越高,一般来说,ＴａｑＤＮＡ聚合酶在进行ＰＣＲ延伸反应过程中的错配率为０．５％左右。ＴａＫａＲａ公司独自研制成功的ＰｙｒｏｂｅｓｔＤＮＡ聚合酶是一种来源于Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓｓ…     

DNA片段的高效克隆

用Taq酶进行PCR扩增时,其PCR产物的3末端有一个附加的A碱基。因此,目前在克隆PCR产物时一般使用T－VCctor。但T—Vector的价格比较昂贵,而使用本试剂盒也可在短时间内使PCR产物与平滑末端载体进行高效连接。PCR产物与平滑末端的载体连接时,有必要除去3廉端的附加碱基,并使其5末端磷酸化。使用TaKaRaBKLKit（BllllltillgKillstiollLigstiollKit）可使这一连串的反应在短时间内完成。PCR产物的末端平滑化与磷酸化反应在一个反应体系内同时进行,一次反应后便可得到能够用于连接的DNA片段。用于连接反应的PCR产物无需进…