应用高通量测序技术对蚊携带RNA病毒的检测研究

目的:基于高通量测序技术,分析我国不同边境地区蚊虫携带病原的多样性,为快速筛查蚊媒病原提供参考依据。方法:将采自不同边境地区的田间样品随机分为6组,提取病毒核酸,然后使用Ion S5 XL测序仪进行高通量测序,并进行生物信息学分析。结果:在6个蚊类混合样本中,有4个混合样本发现2种及2种以上的可疑病毒。结论:高通量测序检测体系有效地检测出蚊媒病毒的存在,初步揭示了蚊类所携带的病原体种类的多样性。     

库蠓源蓝舌病病毒1型的分离和初步鉴定

为监测云南边境地区虫媒库蠓蓝舌病病毒携带情况,本研究对2013年-2017年从云南6个口岸及周边地区采集到的约5 400只库蠓样本,分180组。采用荧光定量RT-PCR检测、鸡胚和细胞分离、目的基因克隆测序分析和间接免疫荧光试验等进行病毒分离与鉴定。结果显示:采集库蠓样本中有20组检出蓝舌病病毒核酸,检出率为11.11%(20/180);接种后有1份样本能导致鸡胚胚体充血出血和死亡以及BHK-21细胞呈现明显的细胞病变;RT-PCR能从感染细胞样本中扩增出蓝舌病病毒VP7基因特异性片段,且该片段序列与国外BTV-1毒株相应序列的相似性达95%~99%;间接免疫荧光试验显示分离病毒能与BTV-1抗体发生特异性结合。结果表明,云南边境地区库蠓携带有蓝舌病病毒,且为BTV-1,因此应加强对云南边境地区蓝舌病的预防与控制。     

自体干细胞移植治疗胆汁性肝硬化的临床疗效及对患者肝脏弹力硬度、血清TGF-β1、SIL-2R水平的影响

目的:探讨自体干细胞移植治疗胆汁性肝硬化的临床疗效及对患者肝脏弹力硬度、血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、可溶性白细胞2受体(SIL-2R)水平的影响。方法:选取2015年1月至2017年8月于我院就诊90例的胆汁性肝硬化患者作为本研究对象,采用随机数表法将其分为观察组和对照组,每组45例。对照组给予熊去氧胆酸胶囊、多烯磷酯酰胆碱胶囊、复方甘草酸苷片等常规治疗,连续治疗24周;观察组在和对照组相同方法治疗4周后,进行自体干细胞移植治疗。比较两组的临床疗效、治疗前和治疗后24周的肝功能、肝脏弹力硬度值、血清TGF-β1、SIL-2R水平的变化及不良反应的发生情况。结果:治疗后,观察组临床疗效总有效率为86.67%(39/45),明显高于对照组[66.67%(30/45)](P0.05)。两组治疗后血清碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转肽酶(GGT)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)较治疗前均显著降低(P0.05),且观察组血清ALP、GGT、ALT、AST、TBil水平均明显低于对照组(P0.05)。两组治疗后肝脏弹力硬度值较治疗前均明显降低(P0.05),且观察组肝脏弹力硬度值明显低于对照组[(6.20±1.05) kPa vs.(7.33±1.27) kPa](P0.05)。两组治疗后血清TGF-β1、SIL-2R水平较治疗前均明显降低(P0.05),且观察组血清TGF-β1、SIL-2R水平均明显低于对照组[(7.40±1.21)ng/mL vs.(9.23±1.49)ng/mL,(130.45±11.03)ng/L vs.(162.93±15.62)ng/L](P0.05)。两组不良反应总发生率分别为11.11%(5/45)、15.56%(7/45),组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:自体干细胞移植治疗胆汁性肝硬化患者的临床效果显著,可有效改善患者肝功能、肝脏弹力硬度值,降低血清TGF-β1、SIL-2R的表达,且安全性高。     

宠物与外来动物病

宠物伴随人类文明已有数千年的历史。当今宠物日益受到大众青睐,给人们带来精神上享受,但宠物是外来动物疾病一个潜在载体,对人们身体健康和畜牧生产造成影响。本文概括了我国宠物外来动物疾病的现状及潜在的威胁,简要分析了几种外来动物疾病的特点,对防止宠物引入外来动物疾病给出了意见和建议。     

禽流感病毒分型基因芯片的研制

[目的]禽流感病毒是一种全球重要的人和动物呼吸道病病原,快速确定其不同亚型对于全球流感监测具有重要的意义.本研究意在研制一种可同时鉴定禽流感病毒所有亚型的方法.[方法]根据GenBank上已发表的禽流感病毒不同亚型(16个HA亚型和9个NA亚型)的基因序列,设计合成了25对特异性引物和1对通用引物,然后以各亚型病毒的参考株RNA作为模板,建立扩增不同亚型的多重RT-PCR方法.参考各亚型病毒靶cDNAs区域的保守序列设计了52条亚型特异的探针,进而利用扩增的各亚型病毒的靶cDNAs对其特异性进行评价.在此基础上,将设计好的探针点制到处理好的玻片上,制备了禽流感病毒分型鉴定基因芯片,结合所建立的扩增不同亚型的多重RT-PCR方法,开发了禽流感病毒亚型鉴定基因芯片试剂.利用收集自49个地区的2653份标本对其特异性和敏感性进行了初步评价.[结果]用于评价的各亚型参考毒株均出现良好的特异性杂交信号,检测的敏感度可达2.47 PFU/mL或2.5 ng靶DNA片段,而且与禽类常见的IBV、NDV等6种病毒均无交叉反应.[结论]证明该病毒分型基因芯片具有良好的特异性、敏感性.     

结肠腺瘤发生的危险因素及和幽门螺杆菌感染的相关性分析

目的:分析结肠腺瘤发生的危险因素及和幽门螺杆菌(Hp)感染的相关性。方法:选择我院2018年6月～2018年12月收治的180例结肠腺瘤患者,同时选择我院接受结肠镜检查无异常者152例作为对照组。收集和比较两组患者的一般资料,采用14C尿氮呼气试验检测Hp的感染情况,多因素Logistic回归分析结肠腺瘤发生的危险因素。结果:多因素Logistic逐步回归分析结果显示男性、年龄、体质指数24 kg/m~2、腹型肥胖、饮酒、吸烟、喜食红肉、喜食果蔬、高脂血症、糖尿病、粪便隐血阳性、肿瘤家族史及Hp阳性是结肠腺瘤发生的危险因素,喜食果蔬为其发生的保护因素。HP阳性率组腺瘤1 cm、腺瘤数目多发、左结肠率高于Hp阴性组(P0.05);Hp阳性组和Hp阴性组肠腺瘤患者腺瘤蒂部分型、腺瘤病理类型比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:结肠腺瘤的发生和多种危险因素有关,其中Hp感染可增加结肠腺瘤发生发展风险,临床应将此类高危人群作为结肠腺瘤的重点筛查对象,以降低结肠癌的潜在发生风险。     

生物教学中如何培养学生的创新精神

创新精神是一项综合能力。它包括观察,思维等多方面的能力。创新不是一般的思考,而是课堂教学启动各个环节的实施过程。在这个过程中实施的主体是学生。     

流感病毒NS1蛋白稳定表达的A549细胞系建立

A型流感病毒的NS1(Nonstructurol 1 protein,NS1)蛋白是病毒复制、毒力等的重要调节蛋白.运用RT-PCR方法扩增A/Beijing/501/2009(H1N1)流感病毒NS1基因,克隆至真核表达载体pCMV-HA,用Lipofectamine2000将线性化pCMV-HA-NS1与neo基因共同转染A549细胞,通过G418筛选获得阳性重组细胞,并采用PCR、RT-PCR、Western blot技术检测重组细胞中NS1蛋白的表达,通过免疫荧光技术观察NS1蛋白在细胞中的定位.PCR、RT-PCR检测显示NS1基因成功整合进入细胞基因组,并转录为mRNA;Western blot检测显示重组细胞系稳定表达NS1蛋白,免疫荧光显示NS1蛋白定位于细胞核内.表明通过G418筛选,成功构建稳定表达NS1蛋白的重组A549-HA-NS1细胞系,且NS1蛋白定位于细胞核内,为进一步研究NS1蛋白的生物学功能奠定基础.     

悬浮芯片技术应用进展

悬浮芯片技术(SAT)是一种新型、高通量的生物芯片技术,它是将流式细胞术、激光技术及应用流体学等技术结合在一起,利用悬浮在液相中的分类荧光编码微球作为检测载体,具有高通量、速度快、灵敏度高、特异性强及检测范围广等特点.近几年来,悬浮芯片技术在免疫学、基因组学、蛋白质组学及临床诊断检测等方面应用较广泛.就其原理、技术特点...     

自体干细胞移植治疗失代偿期肝硬化的疗效及对肝脏储备功能、血清LPS、HGF水平的影响

目的:探讨自体干细胞移植治疗失代偿期肝硬化的疗效及对肝脏储备功能、血清内毒素(LPS)、肝细胞生长因子(HGF)水平的影响。方法:选择2015年9月至2017年9月我院接诊的86例失代偿期肝硬化患者作为本研究对象,通过随机数表法将其分为观察组和对照组,每组43例。对照组给予失代偿期肝硬化常规综合治疗,观察组在对照组基础上进行自体干细胞移植治疗。比较两组治疗前、治疗12周后实验室指标、终末期肝病模型系统评分(MELD)、血清LPS、HGF水平的变化以及不良反应的发生情况。结果:治疗后,两组丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)水平均明显低于治疗前,白蛋白(ALB)较治疗前显著升高(P0.05),观察组ALT、AST、TBil均明显低于对照组,ALB水平明显高于对照组[(45.60±4.12)U/L vs.(56.84±6.20)U/L,(57.45±5.01)U/L vs.(68.99±6.84)U/L,(36.53±3.45)g/L vs.(30.42±2.89)g/L,(50.23±4.83)μmol/L vs.(62.30±6.76)μmol/L](P0.05);治疗后,两组MELD评分较治疗前显著降低(P0.05),观察组MELD评分明显低于对照组[(21.89±2.74)分vs(27.84±3.51)分](P0.05);治疗后,两组血清LPS较治疗前显著降低,HGF较治疗前显著升高(P0.05),观察组血清LPS明显低于对照组,HGF明显比对照组高[(0.43±0.05)ng/mLvs(0.60±0.09)ng/mL,(389.56±27.40)pg/mL vs(301.23±22.30)pg/mL](P0.05)。对照组和观察组治疗期间不良反应总发生率分别为8.89%(4/43)、13.95%(6/43),差异无统计学意义(P0.05)。结论:自体干细胞移植治疗失代偿期患者可明显改善肝功能、肝脏储备功能及血清LPS、HGF的表达,且安全性高。