黑曲霉水解京尼平苷β-葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶学性质

黑曲霉Aspergillus niger发酵豆渣产β-葡萄糖苷酶(BGL)。粗酶液依次经过乙醇沉淀和DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析,获得了两种电泳纯的β-葡萄糖苷酶BGL1和BGL2,它们的相对分子质量分别为102kDa、97kDa,总酶活回收率达到48%。在pH2.5及温度为55℃时,两种BGL水解京尼平苷的速度均达到最大;BGL水解活性受到Na+的激活但不受K+的影响,但Mg2+、Ba2+、Cu2+、Fe2+、Zn2+和Hg+等离子对BGL活性有不同程度的抑制作用(其中对BGL1的抑制普遍强于BGL2),而且同一种离子对不同BGL活性的影响性质不同,Ca2+显著激活BGL1而对BGL2无影响,Fe3+显著抑制BGL1而激活BGL2。在同样条件下,BGL对对硝基苯-β-D吡喃葡萄糖苷(pNPGlu)、对硝基苯-β-D吡喃半乳糖苷(pNPGal)和水杨苷均有催化活性,其中对pNPGlu的Km值最小,BGL1、BGL2分别为0.764和1.934mmol/L;而BGL对京尼平苷水解的催化效率最高,BGL1、BGL2的Kcat/Km值分别为4.28×104和1.04×105L/mol·s。BGL1、BGL2活性的pH稳定范围相近,分别为pH2.0-7.0、pH2.0-8.5,但它们的热稳定性差异较大,55℃时BGL2保温60min,酶活保留了60%,而BGL1的酶活半衰期只有10min。     

多肽分子疏水性的电喷雾飞行时间质谱法快速测定

疏水作用是决定生物分子的结构和性质的重要因素,特别是在蛋白质的折叠,药物分子与受体(蛋白质、DNA等)的相互作用中起着关键作用.分子疏水性的强弱决定于分子内非极性基团的含量.在一定的实验条件下,电喷雾所获得的信号与多肽分子内非极性基团的面积呈现良好的相关性.因此,采用电喷雾飞行时间质谱法,在数分钟之内快速测定了不同多肽之间的疏水性,所获得结果与色谱法结果一致.     

栀子蓝色素的发酵及分离纯化工艺的研究

以宇佐美曲霉AS3．758为发酵菌株、栀子黄废液为原料,以液态发酵方式生产栀子蓝色素,通过正交试验法优选栀子蓝色素的最佳工艺条件。结果为：培养温度为29％、发酵液pH为6．5、发酵培养时间为36h,发酵结束后经水解、过滤,滤液中加入谷氨酸钠,反应后得栀子蓝色素液,转化率达98．43％。色素液经D301离子交换树脂吸附,再用1.0mol／L盐酸洗脱,洗脱液经低温干燥得到的栀子蓝色素,色价E1cm ^1%（590nm）达55．6。     

氨基酸为显色剂比色法测定京尼平的含量

建立了一种京尼平含量的快速测定方法。研究了京尼平与氨基酸的显色反应条件,京尼平(0.0768mg·mL1)与氨基酸溶液(0.2mg·mL1)体积比为1:1,100℃下显色反应10min,检测波长590nm。该方法检测线性范围为0.76～30.73·g·mL1,线性回归方程为Y=0.2409X 0.0036,相关系数为0.9998,最低检测限为0.38μg·mL1,精密度为1.6%。本方法操作简便、快速,且结果准确可靠。     

微生物挥发性代谢产物的产生途径及其质谱检测技术

微生物挥发性代谢产物（MVOCs）是微生物代谢产物的重要组成部分，是人类了解微生物生命活动本质规律的重要窗口，也是提高微生物利用价值的重要物质基础。MVOCs种类较多，按其化学结构不同可分为醇类、醛类、酸类、酯类和酮类等化合物。由于这些化合物的理化性质差异较大，在样品中含量低且浓度差异大，经常与大量的复杂基体共存，一般需要对其进行分离、富集后才能够进行分析测定。本文归纳了常见MVOCs的产生途径，综述了常规质谱分析方法在MVOCs分析检测中的应用，同时结合本课题组的研究工作，介绍了新兴的复杂基体样品快速质谱分析技术的原理，评述了它们在MVOCs检测中的优势，并展望了质谱技术在MVOCs检测方面的发展趋势。