表达全人源抗人IgE单抗的细胞株构建及筛选

目的:构建及筛选高效表达原创性全人源抗人Ig E单克隆抗体的重组工程细胞株。方法:将采用核糖体展示技术筛选到的原创性全人源抗人Ig E单链抗体(sc Fv)基因改构设计为Ig G1κ型全长抗体,构建重组真核表达质粒并电转染CHO-S细胞,Dot-blot法选取多株高表达克隆进行40ml摇瓶批次培养,再据细胞生长特征及抗体表达量选取高表达克隆进行40ml摇瓶及3L摇瓶流加培养研究,选取候选细胞株并对改构前后抗体的生物学活性进行比较研究。结果:成功构建了p MH3-H、p MH3-L、p CApuro-H、p CApuro-L四种重组真核表达质粒并成功共转染CHO-S细胞。完成了4次电转染8轮细胞克隆筛选,获得两株表达量较高的候选克隆Mab1#和Mab2#,在3L摇瓶流加培养中抗体表达量分别达到470mg/L及499mg/L。生物膜光干涉技术(Bio-Layer Interferometry,BLI)亲和力结果显示Mab1#及Mab2#两株单抗亲和力均达到nmol/L级(10-9),与现有唯一上市的抗人Ig E单抗药物奥马珠单抗(Omalizumab)的亲和力相当。选取Mab1#全长抗体与其改构前的母本单链抗体的表面等离子共振技术(surface plasmon resonance,SPR)中和活性比较结果显示Mab1#抑制h Ig E与FcεRI结合的EC50为3nmol/L,EC90为9nmol/L,较改造前亲和力提高了4.3倍,中和活性(EC50)提高了23.7倍,中和活性(EC90)提高了41.3倍。结论:成功将表达原创性全人源抗人Ig E的单链抗体(约25k Da)改造为亲和力及中和活性均大幅提升的全长抗体(约150k Da),获得2个候选细胞株。     

消杀型纳米催化剂抗病毒作用的研究

本文探讨112种消杀型纳米催化剂吸附与灭活病毒的功效,为开发新型抗病毒纳米材料提供理论依据。我们将各种纳米催化剂与副流感病毒、人疱疹病毒Ⅰ型、腺病毒1型及5型作用一定时间后,分别以血凝试验及观察CPE变化的方法判断纳米材料对各种病毒的吸附与灭活作用,并在电子显微镜下观察纳米材料对病毒的吸附情况。结果在所检测的112种纳米催化剂中,用血凝试验分别筛选出强吸附力催化剂 29 种、中吸附力催化剂 36 种、弱吸附力催化剂47种。其中,13 种强吸附力催化剂对副流感病毒的吸附率在 87.5%~93.75%之间,并以 AB 24的抗病毒效果最好。     

PCR-SSCP技术及其在微生物学研究中的应用

PCR- SSCP是利用DNA单链构象具有多态性进行基因检测的一种分析技术 ,对该技术的基本原理、方法学的发展情况及其在微生物学研究中的应用作了总结。     

喉返神经对大鼠甲状腺激素分泌的影响

观察了喉返神经对大鼠血清甲状腺素水平和甲状腺摄碘功能的影响：（１）切断大鼠单侧喉返神经后血清甲状腺素（Ｔ４）水平升高,如于切断后立即电刺激其外周端,在３０ｍｉｎ内血清Ｔ４水平甚至降至对照值之下,事先给以阿托品,可阻断电刺激引起的效应。（２）切断单侧喉返神经后该侧甲状腺摄碘增多,以上结果表明,喉返神经抑制甲状腺素的分泌,这作用可能是由Ｍ受体介导调节的。     

糖基化终产物对人肾小球系膜细胞氧化应激及MCP-1表达的影响及机制

目的：探讨体外培养条件下糖基化终产物（AGEs）对人肾小球系膜细胞（HRMCs）中糖基化终产物受体（RAGE）、氧化应激及单核细胞趋化因子-1（MCP-1）表达的影响。方法：将HRMCs与不同浓度的糖化牛血清白蛋白（AGE-BSA）和牛血清白蛋白（BSA）共同培养,或与同一质量浓度的AGE-BSA和BSA共同培养不同时间,以中和抗RAGE抗体封闭细胞膜上RAGE;采用细胞免疫化学法检测AGEs对HRMCs中RAGE表达的影响,流式细胞术检测细胞内活性氧（ROS）,半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测MCP-1 mRNA的表达。结果：在HRMCs中AGE-BSA能够促进RAGE的表达,并以时间和剂量依赖方式促进HRMCs中ROS及MCP-1的表达;ROS及MCP-1的表达水平在加入不同浓度（50、100、200、400 mg/L）的AGE-BSA作用48 h后以及加入质量浓度为200 mg/L的AGE-BSA作用不同时间（12、24、48、72 h）后,较相应质量浓度或时间的BSA组和对照组均明显升高（P〈0.05）;抗RAGE抗体干预后能够部分抑制AGE-BSA诱导ROS及MCP-1的表达,而人IgG没有这种作用。结论：AGEs通过RAGE激活氧化应激效应诱导MCP-1的表达上调,是糖尿病肾病发生发展的可能机制。     

菌丝空泡形态比例与青霉素合成的关系

采用图像处理技术量化菌丝空泡区域比例,并研究菌丝空泡与青霉素合成的关系.结果表明:当空泡区域比例达到20％时,青霉素开始大量合成;当空泡比例达到30％～35％时,青霉素合成最为旺盛;当空泡区域比例超过40％时,青霉素效价下降.菌丝空泡的过度膨胀是发酵进入衰退期的重要标志.     

消杀型纳米催化剂抗病毒作用的研究

本文探讨112种消杀型纳米催化剂吸附与灭活病毒的功效,为开发新型抗病毒纳米材料提供理论依据.我们将各种纳米催化剂与副流感病毒、人疱疹病毒Ⅰ型、腺病毒1型及5型作用一定时间后,分别以血凝试验及观察CPE变化的方法判断纳米材料对各种病毒的吸附与灭活作用,并在电子显微镜下观察纳米材料对病毒的吸附情况.结果在所检测的112种纳米催化剂中,用血凝试验分别筛选出强吸附力催化剂29种、中吸附力催化剂36种、弱吸附力催化剂47种.其中,13种强吸附力催化剂对副流感病毒的吸附率在87.5%～93.75%之间,并以AB-24的抗病毒效果最好.     

东濮凹陷早第三纪的海侵(泛)事件

依据生物化石Ｓｐｈｅｎｏｌｉｔｈｕｓ ｃｉｐｅｒｏｅｎｓｉｓ,Ｄｉｃｔｙｏｃｏｃｃｉｔｅｓ ａｂｉｓｅｃｔｕｓ,Ｃｏｃｃｏｌｉｔｈｕｓ ｐｅｌａｇｉｃｕｓ,Ｒｅｔｉｃｕｌｏｆｅｎｅｓｔｒａ ｓｐ．,Ｓｉｎｏｃｙｓｔａ ｍｉｎｕｔａ,Ｓ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ,Ｃｏｒｄｏｓｐｈａｅｒｉｄｉｕｍ,Ａｃｈｏｍｏｓｐｈａｅｒａ,Ｓｐｉｎｉｆｅｒｉｔｅｓ,Ｏｐｈｉｎｏｍｏｒｐｈａ ｎｏｄｏｓａ,Ｃｌａｄｏｓｉｐｈ