人DNA 拓扑异构酶Ⅰ在毕赤酵母中的表达及发酵条件优化

为了在体外以人DNA拓扑异构酶Ⅰ（hTopo Ⅰ）为靶位进行抗肿瘤化合物的快速筛选,用RT-PCR法从Hela细胞中克隆了hTopo Ⅰ基因ORF并在毕赤酵母中首次成功表达,表达产物可分泌到发酵上清,易于制备。蛋白酶A缺陷的重组酵母（SMD-hTopoI）分泌重组酶的能力比具有蛋白酶A活性的重组酵母（X33-hTopoI和KMhTopoI）更高。通过发酵条件的优化,使用BMMY（pH 7.25）,于20℃,每隔24h补加0.5% (V/V)的甲醇和3% (V/V)的营养液,SMD-hTopo Ⅰ诱导72h后可表达最高的酶活力（43000u/mL）,发酵上清中hTopo Ⅰ可达11 mg/L,约占总蛋白的10%。SDS-PAGE和Western blot分析显示,表达的hTopo Ⅰ为91kD蛋白,无糖基化修饰。     

人DNA 拓扑异构酶Ⅰ在毕赤酵母中的表达及发酵条件优化

为了在体外以人DNA拓扑异构酶Ⅰ(hTopoⅠ)为靶位进行抗肿瘤化合物的快速筛选,用RT-PCR法从Hela细胞中克隆了hTopoⅠ基因ORF并在毕赤酵母中首次成功表达,表达产物可分泌到发酵上清,易于制备。蛋白酶A缺陷的重组酵母(SMD-hTopoⅠ)分泌重组酶的能力比具有蛋白酶A活性的重组酵母(X33-hTopoⅠ和KM-hTopoⅠ)更高。通过发酵条件的优化,使用BMMY(pH7．25),于20℃,每隔24h补加0．5％(V/V)的甲醇和3％(V/V)的营养液,SMD-hTopoⅠ诱导72h后可表达最高的酶活力(43000u/mL),发酵上清中hTopoⅠ可达11mg/L,约占总蛋白的10％。SDS-PAGE和Westem blot分析显示,表达的hTopoⅠ为91kD蛋白,无糖基化修饰。     

水稻内生真菌Fusarium moniliform ZSU-1次级代谢产物研究

为了探索内生镰刀菌对稻田病害生物防治的物质基础,对一株来自健康水稻茎部的串珠镰刀菌Fuscrium moniliform ZSU-1进行发酵培养,用色谱技术分别对其菌体提取物、发酵液提取物进行活性次级代谢产物分离,得到4个化合物,通过1D、2D NMR、质谱等波谱分析,分别鉴定为镰刀菌酸(1)、镰刀菌酸·脱氢镰刀菌酸缔合物(1:1)(2)、白僵菌素(3)和甘露醇(4).鉴于镰刀菌酸、镰刀菌酸·脱氢镰刀菌酸缔合物(1:1)有较强的抗菌活性,推测这两个化合物对稻田病害生物防治可能有一定的意义.     

海洋半知类真菌次级代谢物研究概况

海洋真菌的次级代谢物的研究在20世纪90年代以来取得了很大进展,其中主要在海洋子囊菌和半知菌的菌体和发酵液中发现了很多结构新颖、具有独特生理活性的化合物,这些研究结果表明海洋真菌中蕴含了丰富的新型化合物,将是未来新药研究的重点领域.综述了近年来海洋子囊类真菌活性次级代谢物的研究情况.     

具抗肿瘤活性的乙酰肝素酶抑制剂的研究与开发

乙酰肝素酶是一种内源β-D-葡萄糖醛酸酶,通过抑制肝素酶的活性可抑制肿瘤细胞的生成及转移等。肝素酶抑制剂的研究,已成为抗肿瘤药物的研究热点之一。本文对肝素酶抑制剂作用的机理、筛选方法和已分离或合成的抑制剂等进行了综述,并讨论了今后对潜在的乙酰肝素酶抑制剂海洋生物羊栖菜多糖的开发。本文就DLC-1基因的结构及生物学功能、在乳腺癌中失活的机制和在乳腺癌中的表达及其意义作一综述。     

海洋真菌与细菌发酵物中的环二肽

从红树林真菌1356攻株发酵液中分离到4个环二肽,它们是环Pro-Tyr,环Pro-Ile,环Gly-Phe和环Ala-Phe。另从海洋细菌110菌株发酵液中分离到5个环二肽,它们是环Leu-Ile,环Val-Leu,环Ala-Val,环Ala-Ile和环Ala-Leu。这些环二肽多数是新发现的微生物产物。本比较了分离的环二肽与已经报道的环二肽在来源、结构、功能等方面的区别。     

抗真菌抗生素179M产生菌的分离鉴定和生理特性研究

从大亚湾海底沉积物中分离出一株具广谱抗真菌作用的曲霉（编号为179）,经初步鉴定为黄柄曲霉(Aspergillus flavipes),该曲霉最适生长温度为36℃,最适生长pH为6。其抗真菌代谢产物179M对酵母类真菌的最小抑菌浓度为0.78-12.5μg/mL,对皮肤感染真菌石膏样小孢子菌(Microsporum gypseum)的最小抑菌浓度为1.56μg/mL,179M还能抑制多种植物病原真菌的生长。     

红树林内源生真菌Sporothrix sp.#4335代谢产物的研究

Diaporthin(1),松胞素4(2)是由一株红树林共生真菌Sporothrix sp.#4335中分离的两个化合物,其结构通过光谱分析确定。并首次对化合物1进行了抗人的肝癌细胞hepG 2及抑制人的DNA拓扑异构酶I(hTopoⅠ)的活性测试,结果显示,化合物1有一定的抗肿瘤活性(IC50为23μg/mL),及很强地抑制拓扑异构酶I的活性。     

不同培养条件下红树林真菌1893菌株代谢产物的杀虫活性

本文以白纹伊蚊Aedes albopictus幼虫为试虫,以校正死亡率为指标,采用单因素法和正交设计法,对红树林真菌1893的营养条件进行了筛选,以期获得高活性的代谢产物.结果表明:以蔗糖10 g、酵母膏4 g、粗海盐6 g、MgSO4.7H2O 1 g、蒸馏水1000 mL,pH 6.5为培养条件时,代谢产物的相对效价最高,浓度为15mg/mL的代谢产物对3龄白纹伊蚊幼虫的毒杀死亡率达到了90.25%.     

代谢产物具杀虫活性的红树林真菌1893菌株培养条件的研究

本课题组从香港海域红树林中筛选获得的一株真菌菌株,代号1893,初步研究发现其粗提物对许多重要害虫具有很高的毒杀活性,具有开发成新型杀虫剂的良好前景。为得到该菌株产生较高杀虫活性物质的最佳培养条件,采用单因素法对影响其生长和所产代谢产物活性的温度、起始pH、发酵时间、装液量等因素进行了测定,利用SAS软件进行模拟优化,得出该真菌的最适发酵条件为：温度26．8℃,起始pH6．5,培养时间17天,当在500mL三角瓶中接种生长一致的直径5mm菌饼一块时,其装液量以200mL为最佳。同时发现发酵液pH值和杀虫活性具有相同的变化趋势,二者的相关性系数R^2达到0．93972,由于pH值的检测要比杀虫活性的检测简单快捷得多,建议在实际培养该菌的过程中,可以通过检测发酵液的pH值来预估发酵液的杀虫活性大小。该研究为进一步将红树林真菌1893研发成高效、广谱、无公害、低成本的新型海洋生物杀虫剂打下基础。