兔抗人NESTIN抗血清的制备与鉴定(简报)

巢蛋白(nestin)属Ⅵ类中等纤维蛋白。最初在神经系统发育早期发现有该蛋白的表达。后在正常神经系统中发现仅在未分化的神经前体细胞中有nestin的短暂表达,分化后在神经元和神经胶质细胞中分别被NF(neurofilament,神经丝)和GFAP(Glial fibrillary acidic protein,神经胶质元纤维酸性蛋白)所代替。所以nestin的表达通常被视为神经前体细胞的标志之一。就我们所知,目前商品化nestin的抗体都是鼠抗鼠(克隆Rat401)的抗体,而人鼠之间该蛋白序列的同源性仅为50%左     

细小病毒H-1对人肝癌移植瘤的抑制及其组织学与组织化学的研究

本文用人肝癌裸小鼠QGY-9204移植模型为材料,进行了细小病毒H-1抑瘤的组织学、组织化学及分子生物学研究。以两种不同剂量(5×10~7PFU和5×10~8PFU)的H-1进行瘤内注射,发现注入H-1后的肿瘤生长速率明显缓于对照组,且5×10~7PFU的H-1注入即可产生这一效应。以1×10~8PFU H-1注入瘤内,不同时间进行组织切片观察,发现从感染后第3天起瘤内开始出现坏死,且随感染时间的延长坏死范围也逐渐扩大,而对照组在该期间均未见此变化。电镜结果也表明,在受损的肿瘤细胞内有H-1病毒颗粒存在。PCR反应和ABC免疫染色显示在感染后的肿瘤组织内也有H-1 DNA扩增和NS-1蛋白表达,并且两者显示的时间与组织内坏死的过程相一致。这些结果提示,细小病毒H-1通过它的DNA复制和NS-1蛋白的表达以促进肿瘤的坏死,从而达到肿瘤抑制和裂解。     

用于前体mRNA剪接机制研究的小基因模型的建立和研究应用

建立可用于选择性前体mRNA剪接分析的小基因模型. 以人或小鼠基因组DNA为模板, 通过PCR扩增获得GluR-B, FGF-2R和Zis小基因片段, 并将其克隆至真核表达载体中, 构建了小基因的质粒. 在此基础上, 将上述3个小基因模型和剪接因子Tra2β1或Zis2表达质粒共转染HeLa细胞, 并用RT-PCR进行了被剪接的小基因产物的半定量检测. 结果表明, 这些小基因可用于细胞水平的基因剪接分析, 利用该技术平台, 发现了Zis2亚型可以促进Zis小基因选择性剪接.     

前体mRNA剪接蛋白Tra2β1的抗体制备及鉴定

Tra2 β1是Tra2 β前体mRNA剪接调节蛋白家族中的一个组织分布最广、表达量最多的成员 ,它在选择性前体mRNA剪接中有调节功能 ,而在基础性剪接中不是必需的 .为便于对该蛋白功能的进一步研究 ,需要制备能特异地检测Tra2 β1蛋白的抗体 .选择包含Tra2 β1的N端 12个氨基酸的特异编码序列的Tra2 β2全长编码序列 (共 117个核苷酸 ) ,将其克隆至pGEX 3X表达载体形成GST融合基因 ,并以诱导表达和纯化的该融合蛋白为抗原免疫新西兰兔 ,获得了相应的抗体 .Western印迹和免疫细胞化学分析结果显示 ,获得的抗体能特异地检测Tra2 β1蛋白     

人肝癌细胞p53基因的表达及其对细小病毒H-1的敏感性

本文利用单链构象多态性分析,17号染色体短臂等位基因杂合性分析,Northern印迹,免疫沉淀,p53基因第7外显子酶切等技术检测了两个中国人肝癌细胞系SMMC-7721,YY-8103和一个自发转化的人肝细胞系L-02的p53基因结构与表达。实验表明,这三个细胞系中没有出现17号染色体短臂等位基因杂合性缺失,第4—9外显子也没发生突变,但其mRNA和蛋白表达水平很低。利用MTT比色分析法研究了这三个细胞系和其他已知p53基因背景的八个人肝癌细胞系(QGY-7703、PLC/PRF/5、Huh-7、Hep3B、FOCUS、Tong/ HCC、SK-Hep-1、HepG2)对自主性细小病毒H-1的敏感性。除HepG2细胞外,其他十个细胞系p53基因的结构和/或表达都不正常。经H-1感染(moi=20)后,其敏感性均高于HepG2细胞。本研究初步表明了p53基因结构或表达的不正常可能导致人肝癌或转化细胞对H-1的敏感性的提高。     

成年神经干细胞研究现况

神经干细胞的研究是近期神经科学领域的研究热点,不仅国外相关文献蜂拥而现,国内也有不少初步的研究报道。关于神经干细胞的定义和基础背景知识,已经有多篇综述阐明,在此不再赘述。目前,神经干细胞的研究分为两大领域,即胚胎神经干     

Tra2β1蛋白在神经特异性的基因剪接中的功能

体外(in vitro)生化研究已证明哺乳动物Tra2蛋白是前体mRNA剪接的重要调控因子,但是,对该蛋白在in vivo条件下的剪接功能,尤其是在神经特异性基因剪接中的功能及其细胞特异性,目前所知甚少。本文采用in vivo分析模型,在COS-l和PFSK两种不同类型的细胞中,研究了两个神经特异性基因(GluR-B,SMN2)剪接的细胞特异性,同时分析了Tra2β1在这两个基因剪接中的功能及其细胞特异性。结果表明,在研究的两种细胞中,GluR-B和SMN2“小基因”的剪接均具有明显的细胞特异性;而Tra2β1蛋白的过量表达在这两种不同的细胞中对“小基因”的剪接有显著的相同倾向的调节作用,提示Tra2β1蛋白对该两个基因剪接的调节作用可能没有细胞特异性。     

Tra2β1蛋白在神经特异性的基因剪接中的功能

体外(in vitro)生化研究已证明哺乳动物Tra2蛋白是前体mRNA剪接的重要调控因子,但是,对该蛋白在in vivo条件下的剪接功能,尤其是在神经特异性基因剪接中的功能及其细胞特异性,目前所知甚少。本文采用in vivo分析模型,在COS-1和PFSK两种不同类型的细胞中,研究了两个神经特异性基因(GluR-B,SMN2)剪接的细胞特异性,同时分析了Tra2β1在这两个基因剪接中的功能及其细胞特异性。结果表明,在研究的两种细胞中,GluR-B和SMN2“小基因”的剪接均具有明显的细胞特异性;而Tra2β1蛋白的过量表达在这两种不同的细胞中对“小基因”的剪接有显著的相同倾向的调节作用,提示Tra2β1蛋白对该两个基因剪接的调节作用可能没有细胞特异性。     

自发转化的人胎肝细胞株对细小病毒H—1感染敏感性的变化

H-1属自主性细小病毒,对相当多种类的体内外生长的肿瘤细胞和转化细胞有抑制作用。本文报道了人胎肝细胞株HuL-1在其发生自发转化后,对H-1病毒感染的敏感性同时发生了变化的结果。 HuL-1细胞经数年体外培养后其性状发生了明显变化,在0.3％软琼脂中的集落形成率达20.1％,在裸小鼠体内能形成实体瘤,且瘤块的组织切片显示出癌细胞的特性。与此同时,HuL-1细胞对H-1病毒的感染表现出一定的敏感性。而HuL-1细胞在数年前并不表现出转化细胞的特性,对H-1感染也是不敏感的。结果显示,HuL-1细胞对H-1敏感性的提高与其本身的自发转化是密切相关的。 本文研究了上述敏感性的可能机制。结果表明,受感染细胞存活率的下降,伴随着病毒抗原的产生,也伴随着H-1 DNA复制量的明显增加,以及H-1非结构蛋白NS-1基因的表达。     

前体mRNA剪接及剪接调节因子SR蛋白和Tra2蛋白

在高等真核生物中,前体mRNA的剪接及其调节是一个复杂的、由多因子参与的过程,它对基因的正常功能的发挥起着重要的作用,任何一种剪接调节因子的异常变化均有可能导致疾病的发生。因此,研究参与前体mRNA剪接调控的相关因子的功能及作用机制,对前体mRNA剪接机制的阐明,无疑是相当必要的。本文着重介绍了两类重要的mRNA剪接调节蛋白——SR蛋白和Tra2蛋白的研究近况,以期对前体mRNA剪接机制的研究的重要性和复杂性有更多的了解。