表面展示新城疫病毒部分F蛋白的重组干酪乳杆菌的构建及其免疫原性

本研究旨在构建重组干酪乳杆菌pLA-Newcastlediseasevirus (NDV)-F/Lactobacillus casei,获得表达产物,并探讨其免疫效果。利用PCR扩增携带部分主要抗原表位的NDV F基因,与穿梭质粒pLA连接转化至大肠杆菌BL21 (DE3)中,筛选阳性重组质粒,将其电转化至干酪乳杆菌中,构建重组干酪乳杆菌pLA-NDV-F/L. casei,应用PCR鉴定阳性菌株,Western blotting鉴定重组菌反应原性,间接免疫荧光、流式细胞术和激光共聚焦检测蛋白表达情况。试验选用14日龄雏鸡,各组免疫方式为口服+滴鼻。设立pLA-NDV-F/L. casei两次免疫组和三次免疫组、弱毒疫苗组、 pLA/L.casei、未攻毒PBS组和攻毒PBS组。间接ELISA方法检测雏鸡血清IgG、肠道、鼻腔、肺脏中sIgA抗体效价,评价试验组雏鸡攻毒保护率。结果表明,有94.10%的重组菌表达了F蛋白,且高效表达在干酪乳杆菌细胞表面,蛋白大小为62kDa,并能与抗NDV阳性血清特异性结合。各免疫组anti-F IgG和s Ig A抗体水平显著高于对照组,p LA-NDV-F/L. casei三次免疫组抗体持续时间比两次免疫组延长28 d,抗体峰值没有显著差异。免疫pLA-NDV-F/L. casei三次、两次、弱毒疫苗、pLA/L. casei和PBS的攻击保护率分别为80%、80%、90%、0%和0%。因此,利用干酪乳杆菌表达体系成功表达了携带部分抗原表位的NDVF基因,具备良好的反应原性和免疫原性,可诱导机体产生保护性免疫应答。     

王锦蛇心的位置及其组织学参数和 胶原纤维含量的增龄变化

为阐明王锦蛇（Elaphe carinata）心的位置、组织学参数和胶原纤维含量的发育可塑性,采用形态测量、苏木精-伊红染色和 Masson 染色方法,测定了 1 龄、2 龄以及 50 日龄内王锦蛇个体身体大小和心位置,同时测定并分析了 50 日龄内个体心内膜、心肌层和心外膜的厚度,以及胶原纤维含量的增龄变化。王锦蛇的体重、体全长和体重与体全长的比值都在 2 龄组最高,1 龄组其次,2 和 1 龄组均显著高于 50 日龄内各组（P < 0.05）。肥满度 3 日龄组和 7 ~ 10 日龄组都显著高于 1 和 2 龄组（P < 0.05）。心与吻端的距离,1 和 2 龄组都显著高于其他日龄组（P < 0.05）,但心与吻端的距离与体全长的比值未见组间差异（P > 0.05）。心肌层厚度 50 日龄组显著高于 3 日龄组、20 日龄组和 30 日龄组（P < 0.05）,心外膜和心内膜厚度未见日龄差异（P > 0.05）。心肌层和心壁胶原纤维含量 50 日龄组都显著高于 3 日龄组和 20 日龄组（P < 0.05）。王锦蛇心与吻端的距离与体全长的比值随发育进程无明显变化,在首次 蜕皮和主动摄食后,心肌层厚度增厚、胶原纤维含量增多,提示心肌功能逐渐增强。