高效马铃薯遗传转化体系的建立及甜蛋白基因的导入

本研究选用了三个马铃薯(Solanum Iuberosum L.)栽培品种“85T-14-3”、“86-2”及“Favorita”的块茎、微型薯和试管薯为起始材料,应用根癌农杆菌 Ti 质粒系统成功地建立了一种方法简单、速度快和频率高的遗传转化体系。其中试管薯薄片的转化速度最快,经根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)共培养后,薄片在100mg/L 卡那霉素的分化培养上,2—3周就可产生出抗性小芽,这些小芽进一步仲长后可在50—100mg/L 卡那霉素的无激素MS 培养基上生根。从共培养到转化植株的获得只需6—7周。微型薯和试管薯的转化频率较高,最高可达67.5%。大多数抗性植株均能检测到胭脂碱合成酶或 GUS 基因的表达。把带有甜蛋白基因和胭脂碱合成酶标记基因的Ti质粒导入马铃薯,获得大量转化植株。叶片抗性检测和 nopaline 检测可推断外源甜蛋白基因已进入马铃薯基因组。     

芸苔属作物的原生质体培养和细胞融合

本文就70年代以来芸苔属作物的原生质体培养和细胞融合技术的研究进展及其应用前景作了综述,特别对通过细胞融合产生胞质杂种及其在芸苔属作物育种实践中的应用作了讨论。     

甘蓝与大白菜原生质体的电融合研究

用电融合法进行了萝卜胞质雄性不育甘蓝(Brassica oleracea var.capitata)叶肉原生质体与大白菜(Brassica campestris var.pekinensis)悬浮细胞原生质体的融合.使用宽间距(电极间距1.5mm)电融合小室,操作简易.两种原生质体的异源融合率最高可达46±6%,其中异源双体融合率可达11±1%.异核体在与双亲原生质体共培养(10~4/ml)时,24小时就有近10%发生第一次分裂,48小时后可达70%左右.培养24—48小时后用稀释法挑选出异核体,部份异核体可在低密度(10~2/ml)甚至单细胞条件下持续分裂.由此获得了异核体来源的愈伤组织,并在分化培养基上再生出了根.     

埃塞俄比亚芥的原生质体培养及植株再生

以埃塞俄比亚芥“84A165”为材料,从3—5日龄无菌苗的子叶、下胚轴或温室生长的三叶期苗的第一真叶游离原生质体,悬浮于 P-B 液体培养基中,用0.15—0.3%低融点琼脂糖固化,薄层漂浮,暗培养。原生质体密度为5×10~3—1×10~4/ml。下胚轴原生质体在培养后48小时出现一次分裂,3天后分裂频率达21%,6天后达34%。子叶和真叶原生质体起始分裂稍晚(第5天),分裂频率也较低。培养1周后,加入稀释培养基 DPDK_3,并转至光下,以后每隔一周加液一次。一个月后获得肉眼可见的小愈伤组织。植板率为2—3%。小愈伤组织在固体增殖培养基上继代长大。子叶和真叶原生质体来源的愈伤组织在转至补加 NAA0.1、BA3mg/1的分化培养基上后获得芽分化,把这些芽切离,转至 IAA0.2mg/l 的生根培养基上,再生出完整植株。