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1.
滚环扩增(RCA)是新近发展起来的一种能特异性扩增环形DNA的实验技术,自2008年以来被广泛用于HBV基因全长扩增及共价闭合环状DNA(cccDNA)耐药突变分析等研究。为了便于鸭乙型肝炎病毒(DHBV)cccDNA的分析,本研究建立了基于RCA的DHBV cccDNA的检测方法。通过针对DHBV高度保守序列设计的4对RCA硫化修饰引物,以血清DHBV DNA为阴性对照,从肝组织DHBV DNA标本中扩增得到DHBV cccDNA。然后用跨缺口引物扩增RCA产物测序替代限制性内切酶切分析进行DHBV cccDNA鉴定。应用该方法检测39份携带DHBV麻鸭肝组织与血清标本结果显示:全部肝组织标本均检出DHBV cccDNA,而全部血清标本则均无DHBV cccDNA检出,表明本研究建立的基于RCA的DHBV cccDNA检测法具有良好的特异性和灵敏性。该方法的建立为应用鸭乙型肝炎病毒动物模型研究cccDNA在病毒致病机制中的作用以及评价抗病毒疗效奠定了实验基础。  相似文献   
2.
为探究双特异性磷酸酶5(dual-specificity phosphatase 5,DUSP5)在巨噬细胞RAW264.7自噬中的调控作用,该研究采用慢病毒转染的技术方法建立DUSP5过表达/干扰RAW264.7细胞株,并用自噬激活剂雷帕霉素(rapamycin,Rapa)和抑制剂巴弗洛霉素A1(bafilomycin A1,Baf A1)分别对其进行刺激,使用蛋白免疫印迹技术(Western blot)、荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR,q RT-PCR)、单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)染色以及免疫荧光等方法探究过表达或抑制DUSP5后对巨噬细胞RAW264.7自噬的影响。结果显示:DUSP5过表达/干扰慢病毒转染RAW264.7可显著提高/抑制DUSP5 m RNA和蛋白的表达量(P0.01);Rapa刺激后,过表达DUSP5抑制自噬相关蛋白Beclin1和LC3II表达且自噬体形成减少,而抑制DUSP5表达结果与此相反;用Baf A1阻断DUSP5干扰RAW264.7稳定转染细胞株自噬流,DUSP5干扰RAW264.7稳定转染细胞株中LC3II表达量和自噬体数量均显著上调(P0.01)。由此说明,DUSP5参与调控巨噬细胞自噬,可能通过抑制自噬体合成来阻碍巨噬细胞自噬进程。此结论为进一步探究巨噬细胞自噬调控机制提供了新的研究思路。  相似文献   
3.
结核病(tuberculosis, TB)是一种主要由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的世界范围内影响广泛的细菌性疾病。巨噬细胞通过细胞表面表达的多种受体感知进而吞噬Mtb。Mtb侵染巨噬细胞时,ESX-1等分泌系统会激活以NLRP3为代表的炎性小体,并促进下游IL-18和IL-1β的活化和分泌。同时Mtb也可以通过Zmp1、Ptp A等方式抑制NLRP3炎性小体活化,使Mtb得以在宿主细胞内存活和繁殖。揭示NLRP3炎性小体在Mtb感染中的作用及活化机制,可为结核病的预防和治疗提供参考。  相似文献   
4.
2000~2008年长白山地区植被覆盖变化特征   总被引:3,自引:0,他引:3  
利用2000~2008年250 m分辨率MODIS/NDVI数据,结合谐波分析、影像处理和多种统计方法分析长白山地区的植被覆盖年内和年际变化特征,并结合区划图和植被类型图对不同区域和不同植被类型的植被覆盖变化进行分析.结果显示:近9年长白山地区覆盖总体呈上升趋势,其中春季植被覆盖略有下降,夏季植被覆盖变化不大,而秋季植被覆盖显著上升;和龙林业局、露水河林业局和长白山自然保护区的植被覆盖较好,而朝鲜一侧、泉阳林业局和长白林业局的植被覆盖较差;针叶林、阔叶林和针阔混交林的植被覆盖要高于荒草地、沼泽地、高山岳桦林和高山苔原,但后几种植被类型的植被覆盖增长趋势明显.  相似文献   
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