鸡β-防御素-1真核表达载体构建及其在Flp-In-293细胞中的表达

以防御素为研究对象探讨其药用开发价值已是国内外生物医学研究领域的热点之一,鸡β-防御素-1 (Gallinacin-1,Gal-1)对许多致病菌都具有杀菌作用,具有很好的研究开发价值.本研究以含有Gal-1成熟肽全长cDNA的重组质粒pMD19-T-Gal-1为模板,通过PCR在Gal-1成熟肽基因C末端引入6×His-tag,并将其克隆到pcDNA3.1 (+)载体中,构建真核表达质粒pcDNA3.1 (+)-Gal-1-His;经脂质体介导转染Flp-In-293细胞,48 h后间接免疫荧光分析,结果重组质粒pcDNA3.1 (+)-Gal-1-His转染的Flp-In-293细胞中有绿色荧光,而阴性对照中无荧光,表明Gal-1-His在Flp-In-293细胞中得到了表达.本研究结果将为进一步研究Gal-1的功能奠定基础.     

家鸡腺苷琥珀酸裂解酶基因多态性与肌苷酸含量的关联及其与红原鸡的亲缘关系

根据腺苷琥珀酸裂解酶(adenylosuccinate lyase, ADSL)基因外显子2的序列设计引物, 用PCR-SSCP的方法对隐性白羽鸡、丝羽乌骨鸡、白耳鸡、藏鸡以及红色原鸡两个亚种进行了单核苷酸多态性分析, 并检测到了多态性, 表现为3种基因型, 对两种纯合子进行直接测序, 结果发现3484位碱基处发生C→T突变。对3种基因型的肌肉肌苷酸含量的最小二乘分析结果显示TT型(突变型)个体的肌肉肌苷酸含量极显著地高于CT型、显著地高于CC型个体, CT型个体也稍高于CC型, 但差异不显著, 初步推测该位点可能与肌肉肌苷酸含量有关。根据该多态位点的基因频率, 基于Nei氏的遗传距离运用NJ聚类法构建系统发生树, 进行家鸡与原鸡的亲缘关系分析, 结果发现, 丝羽乌骨鸡与白耳鸡的亲缘关系最近, 藏鸡和中国红原鸡亚种的亲缘关系也较近, 中国地方家鸡品种与中国红原鸡亚种的亲缘关系较近,而与泰国红色原鸡的亲缘关系较远,隐性白羽鸡与原鸡亲缘关系最远, 初步得出中国家鸡有自己独自的血缘来源的结论。     

东方鲀生长激素基因3′-UTR多态性分析

以暗纹东方鲍(Takifiugu．Obscures)、红鳍东方纯(Takifugu．Rubripes)、星点东方鲍(Takifugu．niphobles)共82个个体为对象,运用单链构向多态性(SSCP)技术和测序技术分析生长激素(Growth Hormone,GH)基因3’非翻译区的多态性。结果表明3个群体中3’非翻译区存在两种长度多态性,分别为320bp和317bp,与GenBank(登录号为：FRU63807)的序列(316bp)有差异;共检测到6种基因型,分别命名为aa、bb、ab、bc、cd、dd,变异频率达4．36%,其中在暗纹东方纯中检测到四种aa、bb、ab、bc,cd和dd基因型分别只在于星点东方纯和红鳍东方纯检测到;7个突变位点中有1处颠换即位点212(T→G),6处转换即位点120、180、227、265、287 (C→T)和位点191)(A→G)。     

红色原鸡和中国家鸡遗传多样性及亲缘关系

对红色原鸡（Gallus gallus）和中国家鸡（Gallus domesticus）之间的遗传多样性和亲缘关系进行系统分析，可以为中国家鸡的起源进化、种质资源保护以及科学开发利用等研究提供理论依据，但迄今尚未见用微卫星标记进行分析比较的公开报道．本研究利用29对微卫星引物对红色原鸡Gallus gallus spadiceus亚种和Gallus gallus gallus亚种以及14个中国家鸡品种的568只个体进行扫描，共检测到286个等位基因，平均值为9．86±6．36；所有群体的期望杂合度为0．6708±0．0251，皖南三黄鸡的期望杂合度最高（0．6442），固始鸡的最低（0．4532）．单个位点偏离Hardy-Weinberg平衡的群体数从0-7不等．整个群体平均遗传分化为17．9％（P〈0．001），约有16．7％的遗传变异源自群体间的差异，所有的位点都极显著地贡献于这一结果（P〈0．001）；杂合子缺失的水平很高，为0．015（P〈0．01），有8个位点显示显著的杂合子缺失．群体间的Reynolds’遗传距离从0．036（萧山鸡-鹿苑鸡）～0．371（泰国红色原鸡-河南斗鸡）不等，而Nm值变异范围为从0．583（泰国红色原鸡-河南斗鸡）～5．833（萧山鸡鹿苑鸡）．NJ系统发生树中，鹿苑鸡、萧山鸡、北京油鸡、河南斗鸡、淮南麻黄鸡、狼山鸡等重体型的鸡种首先形成一大类；鹿苑鸡与萧山鸡以及茶花鸡与藏鸡有着较近的遗传关系；茶花鸡和藏鸡与两个红色原鸡亚种亲缘关系较近，中国红色原鸡Gallus gallus spadiceus亚种与所有中国家鸡品种的亲缘关系比泰国红色原鸡Gallus gallus gallus亚种要近．结果表明：29个微卫星位点均具有较高的多态性，红色原鸡和中国家鸡群体间存在着极显著的遗传分化；中国家鸡和红色原鸡两个亚种的亲缘关系从近到远的排序是：进化型品种-原始型品种（茶花鸡与藏鸡）-中国红色原鸡亚种（Gallus gallus spadiceus）-     

东方鲀生长激素基因3''''-UTR多态性分析

以暗纹东方鲀（Takifugu. Obscurus）、红鳍东方鲀（Takifugu. Rubripes）、星点东方鲀（Takifugu. niphobles）共82个个体为对象,运用单链构向多态性（SSCP）技术和测序技术分析生长激素（Growth Hormone,GH）基因3＇非翻译区的多态性.结果表明3个群体中3＇非翻译区存在两种长度多态性,分别为320bp和317bp,与GenBank（登录号为：FRU63807）的序列（316bp）有差异;共检测到6种基因型,分别命名为aa、bb、ab、bc、cd、dd,变异频率达4.36%,其中在暗纹东方鲀中检测到四种aa、bb、ab、bc,cd和dd基因型分别只在于星点东方鲀和红鳍东方鲀检测到;7个突变位点中有1处颠换即位点212（T→G）,6处转换即位点120、180、227、265、287（C→T）和位点199（A→G）.     

中国红原鸡和泰国红原鸡遗传多样性分析

利用29个微卫星DNA标记对来自中国的红原鸡Gallus gallus spadiceus亚种和来自泰国的红原鸡Gallus gallus gallus亚种进行遗传多样性分析, 评估亚种内的遗传变异和亚种间的遗传分化, 结果表明: 共检测到168个等位基因, 每个位点的等位基因数从2到13不等, 所有位点平均的期望杂合度和PIC值分别为0.5780和0.53。中国和泰国红原鸡29个微卫星位点平均有效等位基因数分别为3.79和4.79, 平均基因杂合度为0.5379和0.6385, 两个红原鸡亚种均表现出较高的群体杂合度和丰富的遗传多样性。群体分化系数为19.4%(P<0.01), 两个红原鸡亚种间的Reynolds’遗传距离和Nm值分别为0.157和1.040。由此可见, Gallus gallus spadiceus亚种和Gallus gallus gallus亚种群体具有不同的群体遗传结构, 群体之间存在明显的遗传分化, 并不能将其认定为是同一亚种, 这也为中国家鸡具有独立的起源提供了一定的佐证。     

孔雀微卫星引物筛选及其遗传多样性分析

利用29对鸡微卫星标记对孔雀基因组DNA进行种间扩增, 发现14对引物能扩增出特异性条带, 每对引物扩增的平均等位基因数为1.71, 有7对引物具有较丰富的多态性, 其中MCW0080和MCW0098最为理想。蓝孔雀和绿孔雀群体间和群体内的遗传分析结果表明, 绿孔雀和蓝孔雀两个群体的期望杂合度分别为0.7422和0.6943, 群体间的遗传分化系数为0.078, Reynolds’遗传距离和基因流分别为0.0603和3.896, 结果显示这两个孔雀群体的杂合度和遗传多样性水平都很低, 且有相互混杂的趋势。     

鸭生长激素基因内含子2、3多态性分析

根据鸭生长激素基因内含子2、3的序列设计5对引物,利用PCR-SSCP方法对北京鸭、西湖野鸭、金定鸭、山麻鸭、荆江鸭、绍兴鸭等6个鸭品种进行了单核苷酸多态性分析, 并检测其多态性。结果共发现8个突变位点, 其中内含子2有7个: 2593处C-T, 2770处G-A, 2813处T-A, 2829处C-A, 2894处C-T, 2896处T-C,3100处C-G; 内含子3有1个: 3270处A-G。统计结果显示, 这8个变异位点的基因型频率分布与品种有关, 在这些基因座的变异水平上, 北京鸭和绍兴鸭表现出了相当的品种保守性, 本研究所检测到的这些基因座可能与鸭的生产性能有关。