人乳头瘤病毒L1基因与丹毒丝菌SpaA-N优势抗原表位序列的嵌合重组质粒构建及活性鉴定

为确定丹毒丝菌表面保护性抗原A的N-末端(SpaA-N)优势抗原表位,研发新型表位DNA嵌合疫苗,利用生物信息学软件对丹毒丝菌SpaA-N的优势B细胞抗原表位进行预测,以重叠PCR将优势表位插入人乳头瘤病毒16型的主要衣壳蛋白( HPV-16 LI) HI环结构的编码序列中,构建获得重组嵌合质粒pcDNA3-HPV-LI -△spaA.该重组质粒经体内、外瞬时特染后,RT-PCR均扩增获得了1 500 bp左右的目的片段.免疫印迹试验显示,体外转染嵌合质粒的细胞总蛋白能够与GST-SpaA-N重组蛋白免疫血清在56 kD处产生特异性结合.ELISA分析显示嵌合质粒可在小鼠体内产生差异显著的特异性抗体(P＜0.01),抗体滴度为1:1 000.此外,pcDNA3-HPV-L1-△spaA制备的抗血清至少可在1∶10稀释度条件下,介导外源补体对半数以上的菌体进行杀伤.该研究表明,获得的SpaA-N表位DNA嵌合疫苗具有免疫活性,为研发安全有效的丹毒丝菌新型DNA疫苗提供了一个新思路.     

卵泡刺激素受体FSHR234纳米抗体的分离纯化及多克隆抗体的制备

【背景】卵泡刺激素受体(Follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)在人体成熟破骨细胞及单核细胞表面表达,成为阻断卵泡刺激素(FSH)作用的潜在靶点,制备亲和力较高的FSHR抗体已成为靶向治疗FSH相关疾病的切入点。【目的】构建FSHR重组载体获得表达量较高的可溶性蛋白,进一步制备骆驼多克隆抗体及其纳米抗体。【方法】利用XhoⅠ和Bam HⅠ双酶切重组质粒p ET30a-FSHR234,将目的基因fshr构建于p GEX-4T-1载体并进行原核表达,利用Western blot及ELISA检测目的蛋白的配体结合能力。免疫新疆双峰驼制备骆驼多克隆抗体,并利用噬菌体展示技术筛选获得FSHR纳米抗体。细胞免疫化学法检测FSHR抗体在coav-3的表达情况。【结果】构建了pGEX-4T-1-FSHR234重组质粒,获得了表达量较高的FSHR234可溶性蛋白;并构建了5株FSHR纳米抗体,鉴定出一株结合能力较强的纳米抗体,命名为VHH-3F9。【结论】制备的骆驼FSHR多克隆抗体效价达1:128 000,筛选获得的VHH-3F9纳米抗体能与FSHR234具有较高的结合性,且两者均能表达于coav-3细胞表面。     

丙泊酚靶控输注麻醉维持对老年胃癌根治术患者血流动力学 及苏醒质量的影响

目的:探讨丙泊酚靶控输注麻醉维持对老年胃癌根治术患者血流动力学以及术后苏醒质量的影响.方法:ASAI～Ⅱ级行胃癌根治术的60例患者随机分为A组和B组.两组使用靶控输注麻醉诱导,起始血浆靶浓度为1μg·ml-1 1％丙泊酚泵注,A组采用靶控输注丙泊酚维持麻醉,B组采用七氟烷吸入维持麻醉.记录麻醉前(T0)、切皮后5min(T1)、手术开始30 rmin(T2)、手术开始60min(T3)、停药时(T4)、出室时(T5)各时间点的血流动力学指标的变化.记录患者术后睁眼时间、拔管时间、定向力恢复时间.结果:两组血流动力学指标(SBP、DBP、HR)在T1～T3时点迅速下降,与T0比较均有显著性差异(P＜0.05),T4时血流动力学指标(SBP、DBP、HR)开始上升,至T5时基本达到基线水平,与T0比较差异无统计学意义(P＞0.05).血流动力学指标(SBP、DBP、HR)在组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05).两组术后睁眼时间比较差异无统计学意义(P＞0.05),A组术后拔管时间、定向力恢复时间均低于B组,相比较有显著性差异(P＜0.05).结论:丙泊酚靶控输注麻醉维持对老年胃癌根治术患者血流动力学影响小,患者术后苏醒质量高,是老年胃癌根治术患者理想的麻醉方法.     

卵泡刺激素及其受体与肿瘤的相关性

卵泡刺激素受体(follicle stimulating hormone receptor,FSHR)被认为只表达在人和哺乳动物的睾丸支持细胞和卵巢颗粒细胞中,在生殖中具有重要作用。最近研究发现,FSHR在多种肿瘤血管内皮细胞表面特异表达,这引起了研究者对该受体与肿瘤尤其是与肿瘤血管形成之间关系的关注。本文主要对FSH和FSHR信号通路及其病理意义和在肿瘤中的作用等方面的研究进展进行综述。     

氟比洛芬酯术前预处理对患者术中应激反应的影响

目的：探讨氟比洛芬酯术前预处理对患者术中应激反应的影响。方法：选择我院行全麻下腹式子宫全切术患者60例,随机分为观察组和对照组,每组30例。两组均采用相同的麻醉诱导和维持方案,观察组于手术开始前10min缓慢静注氟比洛芬酯脂微球注射液1mg·Kg。记录诱导前、切皮时、探查时和术毕的平均动脉压和心率;放射免疫分析法测定患者血浆中血浆肾素、血管紧张素Ⅱ、醛固酮、皮质醇的浓度变化。结果：观察组心率、平均动脉压在切皮时、探查时、术毕时均较对照组低,但无显著性差异（p〉0．05）;观察组切皮时、探查时、术毕时血浆肾素、血管肾张素Ⅱ、醛固酮、皮质醇浓度均较对照组低,且差异具有统计学意义（P〈0．05）;两组术中的四种麻药用量均有不同,但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：氟比洛芬酯术前预处理能降低腹式子宫全切术中机体的应激反应,值得推广应用。     

肿瘤相关成纤维细胞与成纤维细胞活化蛋白在肿瘤免疫治疗中的研究进展

除了依赖于肿瘤细胞自身的恶性增殖以外,肿瘤的发生和发展还依赖于肿瘤细胞与肿瘤间质微环境的相互作用。肿瘤间质中存在的肿瘤相关成纤维细胞（tumor-associatedfibroblasts,TAF）能够诱导免疫抑制,是肿瘤免疫治疗中的一大障碍。在TAF上存在一种成纤维细胞激活蛋白（fibroblast activationprotein,FAP）,它在细胞表面发挥作用,是一种膜丝氨酸肽酶,是Ⅱ型丝氨酸蛋白酶家族成员之一,具有二肽肽酶及胶原酶活性,在肿瘤微环境中表达FAP的肿瘤相关成纤维细胞是最早被鉴定的一种肿瘤间质细胞类型。它由肿瘤问质中的成纤维细胞与癌细胞相互作用而活化,是肿瘤微环境中最主要的宿主细胞,具有促进肿瘤细胞生长、侵袭及免疫抑制的作用,而且基因组稳定不易耐药,有望成为肿瘤免疫治疗的新靶标。就靶向TAF和FAP在肿瘤免疫治疗中的研究做一综述,为基于肿瘤间质微环境的免疫治疗提供参考。     

骆驼来源单域抗体在免疫治疗中的研究进展

近几年多种单克隆抗体药物已成功上市并用于治疗人类多种疾病,但因单克隆抗体的复杂结构和高昂的生产成本,限制了其在临床上的广泛应用。随着生物技术的进步,使抗体朝着小型化的基因工程单域抗体发展。20世纪末,在骆驼科动物(camelidae)和护士鲨(nurse shark)体内发现一种天然缺失轻链的重链抗体(heavy chain antibody,HCAb),这种特殊抗体的抗原结合位点仅由单一结构域构成。该结构域在骆驼中称为VHH,经基因重组修饰易于进行工程表达,产物即称为VHH单域抗体,具有分子量小,可溶性好,稳定性高及组织穿透力强等优势,在调节免疫功能方面的应用前景更加广阔。就目前国际上对骆驼来源的VHH单域抗体在免疫治疗应用研究的进展情况进行综述,为基因工程单域抗体改造提供新思路。     

新疆双峰驼天然单域抗体库的构建及初步鉴定

旨在构建新疆双峰驼天然单域抗体库,及从中快速筛选VHH抗体.采用两种不同的抗原(溶菌酶和cAb-HEWL23)用天然文库进行筛选,成功筛选到了相应的抗体,并融溶菌酶筛选的VHH抗体(A3-1,A4-1和A10-1)进行表达和初步的ELISA检测.结果显示,A3-1和A10-1具有结合溶菌酶的能力.该方法简单方便、省时省力,可以快速从天然单城抗体库中筛选VHH抗体.     

β－内啡肽对低氧引起的促肾上腺皮质激素释放因子分泌的影响

本文研究了模拟高原低氧条件下内源性阿片肽β－内啡肽（βｅｎｄｏｒｐｈｉｎ,βＥＰ）对大鼠和高原土著动物高原鼠兔（Ｏｃｈｏｔｏｎａｃｕｒｚｏｎｉａｅ）促肾上腺皮质激素释放因子（ｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｉｎｒｅｌｅａｓｉｎｇｆａｃｔｏｒ,ＣＲＦ）分泌的影响。７０００ｍ低氧２ｈ,正中隆起（ｍｅｄｉａｎｅｍｉｎｅｎｃｅ,ＭＥ）和下丘脑（Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ,Ｈｙ）ＣＲＦ含量水平降低。脑室注射βＥＰ后,海拔７０００ｍ低氧暴露２ｈ,大鼠和高原鼠兔ＭＥ处的ＣＲＦ含量升高,大鼠Ｈｙ的ＣＲＦ含量也升高,而高原鼠兔下丘脑ＣＲＦ含量下降。βＥＰ的作用被纳洛酮反转。上述结果提示,βＥＰ有抑制由低氧引起的大鼠ＣＲＦ分泌的作用。     

抗CD133胞外区骆驼多克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备高效价、高特异性的抗CD133胞外区新疆双峰驼来源的多克隆抗体,为制备高亲和力的抗CD133纳米抗体做准备。方法:将CD133胞外区基因序列构建到原核表达载体pET28a中,诱导表达及纯化CD133蛋白,免疫新疆双峰驼及新西兰兔。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)和Western blot检测多克隆抗体的效价及与CD133特异性结合活性。结果:ELISA测定抗-CD133骆驼源抗体的效价可达到百万以上,通过Western blot检测多克隆抗体可特异性结合CD133蛋白。结论:重组人CD133蛋白可以在骆驼体内激发高滴度抗体反应,为今后构建骆驼免疫单域抗体噬菌体展示文库奠定基础。