藤黄酸聚乳酸纳米粒的研制

以新型材料聚乳酸(PLA)为载体,研制出质量稳定的藤黄酸聚乳酸纳米粒(GA-PLA-NPs)乳液制剂,并对其安全性进行评价。采用改良的溶剂蒸发法制备藤黄酸聚乳酸纳米粒(GA-PLA-NPs);用透射电子显微镜（TEM）观察纳米粒的形态;用激光粒度分析仪测定其平均粒径大小和分布;经超速离心后用紫外分光光度计测定纳米粒的包封率与载药量;考察藤黄酸纳米粒的体外释放特性;经急性毒性实验考察藤黄酸纳米粒的安全性。得到确定处方工艺为：水相∶有机相为2∶1（v/v）,表面活性剂在有机相中的浓度为0.5%（w/v）,藤黄酸（GA）在有机相中的浓度为0.1%（w/v）,GA∶PLA为1∶4（w/w）。处方条件下制备的纳米粒平均粒径为51.36 nm;平均包封率与载药量分别为98.87%和13.3%;藤黄酸纳米粒的体外释药分为两相：突释期和缓释期;急性毒性试验测得藤黄酸纳米粒的ID50为26.3mg/kg。制备的藤黄酸聚乳酸纳米粒（GA-PLA-NPs）质量稳定、分散性良好。聚乳酸可能成为藤黄酸的新型载体。     

中华白海豚3个MHC基因座位遗传变异的初步分析

主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)基因是由一组紧密连锁的基因组成,是哺乳动物免疫系统中最重要的组成部分.本文选择3个MHC基因座位的第二外元,即:MHC-I类基因和II类基因的DRA和DQB座位,初步调查濒危物种中华白海豚的遗传变异.共鉴定了2个DRA、2个DQB和7个MHC-I等位基因.DRA座位遗传变异非常低,而DQB和MHC-I座位具有相对较高水平的遗传变异.并且,在DQB和MHC-I基因座位的假定的抗原结合位点(Antigen binding sites,ABS),非同义替代明显大于同义替代,提示平衡选择(Balancing selection)维持这两个座位的多态性,而在DRA座位上,并没有检测到平衡选择.系统发生分析表明中华白海豚的MHC等位基因没有聚在一起,而是和其他的物种聚在一起,符合MHC跨种进化(Trans-species evolution)的模式.     

基于CATS法的江豚SNPs位点筛选

通过比较锚定序列示踪(Comparative Anchor Tagged Sequences, CATS)法,选择人、小鼠及其它哺乳动物中已知的5对CATS引物,通过PCR反应从江豚(Neophocaena phocaenoides)基因组中扩增出相应的DNA片段,结合变性高效液相色谱(Denaturing High Performance Liquid Chromatography, DHPLC)和DNA直接测序等技术,进行江豚单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphisms, SNPs)位点的筛选.通过不同个体同源序列的比对分析,发现其中的4个DNA片段具有多态性,共检测出7个SNPs位点,即大约每370 bp出现1个SNPs.本研究为进一步利用CATS法获得江豚及其它野生动物种群的SNPs位点并进行种群遗传学分析奠定了基础     

DNA池结合DHPLC和直接测序技术在江豚SNPs检测中的应用

选取江豚基因组中的2个已知单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)位点,通过PCR扩增,将PCR产物按基因频率不同制备成0～50%的11个DNA池(DNA pool),用于变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC)和直接测序分析,以探讨DNA池中基因频率的最低要求.结果显示,当稀有等位基因的基因频率不少于5%时可在DHPLC检测过程中明显分辨;而利用DNA池进行直接测序时的基因频率则需达到10%.这提示,为保证DHPLC分析的准确性和可靠性,制备DNA池时等摩尔DNA混合的个体数最好不超过10个. DNA池结合DHPLC技术的高效性与准确性可在大规模的SNPs位点筛选中发挥作用.