MicroRNA-29b过表达慢病毒载体的构建及其生物学特性的研究

目的:构建针对小鼠microRNA-29b过表达的慢病毒载体,研究其在小鼠神经元GT1-7细胞系中的生物学特性。方法:化学合成两条寡聚核苷酸单链,通过搭桥互补延伸成DNA双链,形成miR-29b的前体结构,将酶切后的慢病毒载体FUGW通过同源重组的方法与miR-29b的前体结构进行连接,构建相应microRNA-29b过表达慢病毒载体,并包装成病毒颗粒后转染小鼠神经元细胞系GT1-7,通过博来霉素药物筛选获得稳转株,RT-PCR检测相关基因在mRNA转录水平上表达量情况。结果:测序图谱证实重组慢病毒表达质粒f-F-miR-29b构建成功,GT1-7细胞稳转株中,miR-29b的表达量与对照组相比提高了约28倍,其靶基因DCX,Vdac1,Pten的表达量有所抑制,性发育相关基因LH-β,kiss-1,Inshulin,IGF-I,GPR54,GnRH,leptin-R没有明显变化。结论:利用慢病毒筛选的方法,成功在小鼠神经元GT1-7细胞中获得microRNA-29b过表达稳转株,为以后microRNA-29b的生物学特性的研究奠定了基础。     

人滋养细胞表面抗原（Trop-2）在病变子宫内膜中表达的研究

摘要 目的：探讨人滋养细胞表面抗原（trophoblast cell-surface antigens2,Trop-2）在病变子宫内膜中的表达及其临床相关性。方法：采用免疫组化法检测100例正常子宫内膜或病变子宫内膜组织中Trop-2蛋白的表达,其中单纯增生子宫内膜患者26例,复杂或不典型增生子宫内膜患者34例,子宫内膜腺癌患者20例,对照组为20例增生期子宫内膜患者。结果：免疫组织化学法研究结果显示,Trop-2蛋白在正常增生子宫内膜和单纯性增生子宫内膜中几乎不表达,在复杂或不典型增生子宫内膜组织中以及子宫内膜腺癌呈阳性表达。主要分布在细胞膜上,阳性率分别为35.29 %和65.00 %,经过对比子宫内膜癌组的阳性表达率显著高于复杂型或伴不典型增生子宫内膜组的阳性表达率（P<0.05）,且复杂型或伴不典型增生子宫内膜组的阳性表达率显著高于单纯性增生子宫内膜组（P<0.05）,其表达水平随内膜病变程度的加重而升高,呈正相关关系（P＜0.05）。结论：Trop-2蛋白在子宫内膜病变中的表达与其严重程度一致,可反映子宫内膜病变的发生发展,或可作为判断其严重程度的指标。     

利用基于CRISPR-Cas9 的基因编辑技术对miR-29a在GT1-7 细胞中进 行基因敲除

目的:本文利用CRISPR-Cas9技术在GT1-7细胞中对miR-29a基因进行基因编辑,用于构建miR-29a基因敲除GT1-7细胞模型。方法:通过构建Cas9稳转的GT1-7细胞株并转染sgRNA质粒用于在靶向miR-29a基因区域引发突变。然后构建EGFP与sgRNA共表达质粒并转染Cas9稳转GT1-7细胞,利用流式细胞仪富集表达绿色荧光蛋白的阳性细胞和分选阳性单克隆细胞。最后利用实时荧光定量PCR(realtimefluorescencequantitativePCR)对富集细胞和单克隆细胞进行miR-29a表达量检测。结果:T7E1检测结果显示CRISPR-Cas9系统有效地在miR-29a基因区域引发了突变。荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,富集后阳性细胞miR-29a的表达量整体下降了50%左右(P0.05)。此外,通过流式筛选获得了一个纯合miR-29a基因敲除细胞克隆,与对照组相比,其miR-29a的表达量下降了75%左右(P0.05)。结论:本文建立了一种有效编辑GT1-7细胞基因的方法,并采用该方法构建了miR-29a稳定敲除细胞模型。     

两种测试方法对DPPH分光光度法测试结果的影响

目的:比较固定反应时间法和动力学监测法的准确性。方法:用固定反应时间法和动力学监测法分别测定维生素C(Vc)、二丁基羟基甲苯(BHT)对二苯代苦味酰自由基(DPPH)的清除作用,通过F检验和t检验来揭示两种方法的差异。结果:通过动力学监测法得到的测试结果更能准确的反映测试样品对DPPH自由基的清除能力。结论:建议在用DPPH分光光度法过程中使用动力学监测法。     

高龄ST段抬高心肌梗死患者经皮冠状动脉介入术后的院内预后及其影响因素分析

目的:探讨高龄ST段抬高心肌梗死(STEMI)患者行直接经皮冠状动脉介入(PCI)术后住院期间的预后情况及其影响因素。方法:回顾性分析2009年1月至2013年12月因STEMI入住我院并行直接PCI的高龄患者(年龄≥75岁)的一般情况、既往史、入院情况、术中及术后情况、并发症等资料,总结分析该类患者住院期间的临床预后,并采用logistic回归模型对可能影响住院期间主要不良心脏事件(MACE)的危险因素进行分析。结果:研究共纳入127例患者,其中男性84例(66.14%),女性43例(33.86%),年龄79±3岁,住院时间13.07±7.80天,住院期间MACE的发生率为17.32%,其中死亡4例(3.15%)。单因素logistic回归分析显示入院时心功能(Killip分级)≥2级、完全性房室传导阻滞、窦性停搏与高龄STEMI患者直接PCI术后住院期间MACE的发生相关,具有统计学意义(P0.05)。而多因素logistic回归分析显示入院时心功能(Killip分级)和完全性房室传导阻滞是高龄STEMI患者住院期间MACE的危险因素。结论:高龄STEMI患者接受直接PCI治疗总体安全,影响其住院期间MACE的危险因素包括心功能不全和完全性房室传导阻滞。     

水葫芦黑斑病菌Alternaria alternata的生物学特性研究

在不同试验条件下培养水葫芦黑斑病菌Alternaria alternata菌株,探讨其主要的生物学特性,结果表明：该菌株生长的最佳培养基为PSA,最佳C源为葡萄糖,弱碱性和中性N源对该菌菌丝生长具有明显的促进作用,而酸性N源对其具有抑制作用。菌株生长的最佳pH值为pH7,最适温度为27℃。湿度越大,对菌株生长越有利。     

水杨酸对铜胁迫下菊芋的生理调控及根系FTIR分析

为阐明水杨酸(salicylic acid,SA)对菊芋吸收铜的影响机理,以耐铜性差异较大的徐州菊芋(Helianthus tubeuosus)和潍坊菊芋作为试验材料,通过盆栽试验,探究外源SA对铜胁迫下菊芋的光合作用、叶片抗氧化系统及必需矿质营养元素吸收的影响,并对其耐铜机理进行探究。结果表明,300mg/kg铜胁迫抑制了两地菊芋光合电子传递效率和PSⅡ活性,对抗氧化系统产生损伤并造成膜脂过氧化,显著增加了根、茎、叶中铜含量,同时削弱了菊芋对钾、钙、镁和锌的吸收能力。喷施1 mmol/L外源SA可通过调控根系中各官能团的比例,加强其对Cu^(2+)的固定作用,促进矿质营养元素的吸收及渗透调节物质的积累,提高菊芋抗氧化和光合作用能力,有效缓解铜对菊芋生长的抑制作用。本研究初步揭示了SA对铜胁迫下菊芋的生理调控,可为种植菊芋修复土壤铜污染提供科学参考和依据。     

水体中氮素对水葫芦生长发育的影响

本文通过对水体中氮素营养条件的研究,分析了水体中不同氮素对水葫芦生长的影响,从而为福建省水葫芦的综合治理提供科学依据。结果表明：在水体氮浓度为25～30mg·L^1的范围内,水葫芦生长情况最佳,高于或低于这个范围,水葫芦的生长发育均受到不同程度的抑制。     

六个虹鳟代表性繁育群体肌肉营养成分分析

研究主要通过分析虹鳟(Oncorhynchus mykiss)不同繁育群体间肌肉品质和营养成分的种质特性,为虹鳟遗传资源的保护利用、优良性状的筛选及新品种选育提供基础数据资料。采用凯氏定氮、索氏抽提和水解氨基酸等现行国家标准测定肌肉中的营养成分、氨基酸和脂肪酸的含量,对国内6个不同地区虹鳟代表性繁育群体进行肌肉营养成分和品质的系统分析和评价。结果表明,各繁育群体水分含量(66.50%—77.00%)、灰分含量(1.12%—1.43%)、粗蛋白含量(19.00%—21.84%)和粗脂肪含量(2.04%—9.08%)有显著差异(P<0.05);17种氨基酸总量(TAA)为15.27%—18.90%,各群体氨基酸指数(AAS)、化学指数(CS)和必需氨基酸指数(EAAI)均高于联合国粮食及农业组织(Food and Agriculture Organization, FAO)标准; 23种脂肪酸中包括8种饱和脂肪酸(SFA)、4种单不饱和脂肪酸(MUFA)和11种多不饱和脂肪酸(PUFA),其含量分别为17.81%—31.75%、27.86%—30.35%和40.25%—54.32%,...