慢病毒介导的甲胎蛋白敲减表达抑制肝癌细胞HepG2的增殖

甲胎蛋白（AFP）是原发性肝癌的标志物.本实验室前期研究表明,AFP的表达与肝癌细胞的增殖及细胞周期相关.为了建立高效稳定的AFPsiRNA细胞导入方法，本研究构建了AFP慢病毒siRNA干涉载体pRNAT-U6.2/AFPsiRNA.并将其转入HEK293细胞后，Western 印迹表明,pRNAT-U6.2/AFPsiRNA的干扰效率为88.7%（P<0.05）. pRNAT-U6.2/AFPsiRNA与4个包装质粒共同转染293T细胞包装成慢病毒后感染HepG2细胞，感染3 d时GFP的表达量达95%，感染35 d的子代细胞中GFP的表达量仍稳定在85%.GFP表达量的观察显示,慢病毒载体可以高效并稳定表达外源基因. Western 印迹结果也显示,HepG2细胞被病毒感染3 d和25 d后，AFP表达水平均有降低，抑制率分别为74.8%和63.4%(P<0.05).克隆形成实验表明,AFP沉默后，细胞克隆形成个数降低63%(P<0.01),表明HepG2细胞增殖能力受到抑制.     

TGF-β1和IGF-1 mRNA在早期胚胎停育绒毛组织中的表达及意义

目的:通过检测胚胎停育患者绒毛组织中TGF-β1和IGF-1 mRNA的表达,探讨其在胚胎停育发病机制中的作用。方法:用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测正常人流(20例),胚胎停育(25例)绒毛组织中TGF-β1和IGF-1基因在转录水平的表达。结果:(1)与对照组相比,实验组绒毛组织中TGF-β1mRNA表达量降低(P0.05),(2)胚胎停育患者绒毛中IGF-1mRNA表达量升高(P0.05)。(3)绒毛组织中TGF-β1与IGF-1的表达呈负相关(r=-0.793,P0.05)。结论:TGF-β1、IGF-1的表达在基因转录水平发生改变,TGF-β1表达的降低可能上调了IGF-1的表达,提示两者可能共同参与了胚胎停育的发生。     

急性心肌梗死患者PCI术后心室重构患者血清Hcy、CysC、MMP-1、NGAL的表达及临床意义

摘要 目的：观察急性心肌梗死（AMI）患者经皮冠脉介入术（PCI）术后心室重构患者血清同型半胱氨酸（Hcy）、胱抑素C（CysC）、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）的表达及临床意义。方法：选取2018年3月~2020年9月期间我院收治的AMI患者70例。根据PCI术后是否发生心室重构将其分为无心室重构组（n=49）和心室重构组（n=21）。检测患者血清MMP-1、Hcy、NGAL、CysC水平及心功能指标[左室后壁厚度( LVPWT)、左室舒张末期内径( LVEDD)、左室射血分数( LVEF)、室间隔厚度( IVST)]。分析血清MMP-1、Hcy、NGAL、CysC水平与心功能指标的相关性。分析AMI患者PCI术后心室重构的影响因素。结果：心室重构组血清MMP-1、Hcy、NGAL、CysC水平均高于无心室重构组（P<0.05）;LVEDD、IVST、 LVPWT均大于无心室重构组,LVEF低于无心室重构组（P<0.05）。Pearson相关性分析结果显示：血清MMP-1、Hcy、NGAL、CysC水平和LVEDD、IVST、 LVPWT均呈正相关,而与LVEF呈负相关（P<0.05）。单因素分析结果显示：两组患者梗死部位、心律失常情况、单核细胞（MO）、肌酸激酶同功酶（CK-MB）、发病到开通梗死相关动脉时间组间对比差异均有统计学意义（P<0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示：梗死部位为前壁、发生心律失常以及高水平的MO、CK-MB、MMP-1、Hcy、CysC均是AMI患者PCI术后发生心室重构的危险因素（P<0.05）。结论：血清MMP-1、Hcy、NGAL、CysC表达均与AMI患者PCI术后的心室重构密切相关,检测以上指标水平可对AMI患者PCI术后心室重构的预测和防治提供一定参考。     

梨小食心虫谷胱甘肽S-转移酶GmolGST6的基因克隆、原核表达和酶学特征

【目的】克隆一种梨小食心虫Grapholita molesta触角中谷胱甘肽S-转移酶(glutathione Stransferase,GST)基因并分析其结构特征,明确其表达特点及该基因编码蛋白的酶学特征,以期为该基因的功能研究提供理论依据。【方法】根据梨小食心虫雌虫触角转录组数据,利用RT-PCR克隆梨小食心虫GST基因;通过实时荧光定量PCR测定该基因在成虫触角、头(去触角)、胸、腹、足和翅中的转录水平;利用原核表达系统和Ni离子亲和层析技术表达和纯化梨小食心虫GST重组蛋白,并对重组蛋白的稳定性和酶促动力学参数进行分析。【结果】获得了梨小食心虫谷胱甘肽S-转移酶基因GmolGST6(GenBank登录号:MF503496)的完整编码序列,开放阅读框为645 bp,编码214个氨基酸,分子量为24.21 kD,理论等电点为5.10;进化树分析和三维结构模拟表明GmolGST6属于Delta亚家族。qPCR测定结果表明,GmolGST6基因在雌雄成虫触角中高丰度表达,且在雄虫触角中的表达量显著高于雌虫。重组蛋白GmolGST6具有催化通用底物CDNB的活性,并且在pH7.5,40℃时具有最高的酶活力。重组蛋白GmolGST6的米氏常数K_m为0.21±0.06 mmol/L,最大反应速度V_(max)为14.02±1.40μmol/min·mg。【结论】根据GmolGST6的表达特点及其重组酶对模式底物CDNB的催化活性,推测在触角中高丰度表达的GmolGST6具有参与降解外源物质、保护嗅觉系统免受外源性物质毒害的功能。     

早期自然流产绒毛组织miR-10b表达及意义

目的:探讨miR-10b在早期自然流产绒毛中的表达及其临床意义.方法:应用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测早期自然流产患者绒毛及正常早孕绒毛中miR-10b的表达水平;在滋养细胞系HTR8中上调miR-10b,研究miR-10b过表达滋养细胞的浸润功能改变.结果:①real-time PCR检测显示,miR-10b在早期自然流产患者绒毛表达(2.916±0.061)与正常早孕绒毛对照组(1.0±0.106)相比增高,差异有统计学意义(P＜0.001).②过表达miR-10b后,侵袭实验证实滋养细胞侵袭力明显增强.结论:miR-10b可能促进了滋养细胞浸润功能,参与了早期自然流产的病理过程.     

小麦吸浆虫滞育研究进展

小麦吸浆虫Sitodiplosismosellana(Gehin)和Contariniatritici(Kirby)是小麦生产中间歇性猖獗发生的害虫 ,也是一种具有典型的滞育多态性的昆虫。该文从滞育特点、影响滞育的因素、滞育幼虫的形态变化、滞育生理特征、滞育幼虫的化学物质变化和我国小麦吸浆虫滞育区划等 6个方面 ,较全面地回顾总结了国内外小麦吸浆虫滞育研究的进展情况 ,并对今后的研究工作进行了展望。     

能谱CT动态增强后单能量CT值、能谱曲线形态及斜率在肾上腺腺瘤与非腺瘤诊断中的应用初探

目的:研究能谱CT动态增强后肾上腺肿瘤单能量CT值、能谱曲线形态及斜率差异的临床价值。方法:应用能谱分析软件处理腺瘤(45个)与非腺瘤(20个)CT动态增强资料,均经手术病理和/或临床资料证实。分别测量腺瘤与非腺瘤在28 s、60 s、180 s时间点的11个单能量点(40~140ke V)CT值、记录能谱曲线形态并计算其低能量段(40~100 ke V)的斜率。结果:在各个时间点,腺瘤与非腺瘤各单能量点CT值差异无统计学意义(P0.05),能谱曲线形态为速降形、缓降形、近似直线形、勺形及弓形五种(p0.05)。在60 s,二者能谱曲线斜率差异有统计学意义(P0.05),而在28 s与180 s,差异无统计学意义(P0.05)。结论:能谱CT动态增强后肾上腺腺瘤与非腺瘤能谱曲线形态及在60 s时低能量段能谱曲线斜率存在差异,可能有助于二者鉴别。     

piwi基因在宫颈癌组织中的表达

目的本研究旨在探讨piwill、piwil3和piwil4在宫颈癌组织与宫颈正常组织中的差异性表达,为进一步确定其在肿瘤发生发展中的作用奠定基础。方法根据已知的3条基因序列设计合成3对特异性引物,利用RTPCR检测9对宫颈癌组织及癌旁正常组织的piwill、piwil3和piwil4 mRNA水平,并以β-actin基因为标准进行对比。结果宫颈癌组织piwill、piwil3和piwil4的表达水平明显高于正常组织。结论piwill、piwil3和piwil4在宫颈癌中的表达提示其可能参与了宫颈癌的发生发展过程。     

孔雀石绿脱色菌恶臭假单胞菌菌株M6的分离、鉴定及其生长特性研究

从养殖池污泥中分离了6株对孔雀石绿具有脱色能力的菌株, 经过进一步在孔雀石绿营养肉汤中富集培养及其脱色率的比较, 筛选出对孔雀石绿具有较强脱色能力的优良菌株M6。菌株M6在30°C、150 r/min条件下对孔雀石绿的脱色率为97.14％, 通过革兰氏染色、电镜对其形态进行了观察, 用ATB细菌鉴定仪对其进行了生理生化鉴定; 通过对其16S rDNA序列进行PCR扩增和测序, 与NCBI中收录的与其同源性较高的菌株进行了聚类分析并构建了系统发育树。此外, 对其生长特性也进行了研究。实验结果表明, 菌株M6革兰氏染色阴性, 杆形, 端生一根鞭毛, 大小约为0.45 mm×0.84 mm, 在孔雀石绿营养琼脂平板上形成的菌落特征为圆形、浅蓝色、粘稠、不易挑取; 菌株M6的16S rDNA序列与GenBank基因库中假单胞菌属的细菌菌株的16S rDNA序列有98％~99％的高度同源性, 菌株M6与恶臭假单胞菌OW-16(登录号：DQ112328.1)的亲缘关系最近。结合传统的形态与生理生化特性鉴定以及16S rDNA序列分析鉴定的结果, 判定菌株M6为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)(登录号：EU348741.1)。此外, 菌株M6在30°C、150 r/min条件下摇床振荡培养的生长曲线为：0 h~4 h为生长延迟期, 4 h~64 h为对数生长期, 64 h~80 h为稳定期, 80 h以后为衰亡期; 其最适生长pH值为7, 最适生长温度为30°C, 在转速为50 r/min~250 r/min条件下, 其浓度随转速的增加而增大。