细胞核重新编程的研究进展

细胞核重新编程是哺乳动物正常胚胎和克隆胚胎发育的关键性因素,主要表现为表观遗传学上变化。在受精卵形成和发育过程中,基因组的甲基化状态和组蛋白的结合形式均发生改变;在核移植产生的克隆胚胎中,供体细胞核也会经历核膜破裂、早熟染色体凝集等变化,重新获得分化的潜能而发育为正常的克隆动物。同时存在多种因素影响重新编程的进行。现对哺乳动物细胞核重新编程的研究进展进行综述,以期为该领域进一步的探索提供借鉴。     

哺乳动物精原干细胞的分离富集及检测鉴定

获得高纯度、高活力的具有生物学安全性的精原干细胞(SSCs)并能从功能上对其进行检测鉴定,是SSCs体外生物学研究的关键所在。近年来,借助于SSCs移植这一功能性检测手段,有关SSCs的分离富集及识别鉴定取得了快速进展。本文结合作者的工作实践,就生精上皮细胞悬液的制备、SSCs的分离富集及其检测鉴定方法进行评述。     

Bmi1基因研究进展

Bmi1是PcG(Polycomb group)家族重要的调控基因,该基因与干细胞的增殖和肿瘤的发生密切相关,中枢神经系统干细胞、末梢神经系统干细胞和造血干细胞都依赖该基因进行自我更新。另外,在小鼠精原干细胞中也检测到该基因的表达,表明该基因对精原干细胞的自增殖也有一定的影响。简要综述了该基因的结构、作用原理、信号通路及对细胞增殖影响的相关研究进展。     

精原干细胞的生物学特性

精原干细胞(spermatogonialstemcells,SSCs)是雄性生殖系干细胞,位于睾丸曲细精管基膜上,既具有自我更新潜能,又具有定向分化潜能,是自然状态下出生后动物体内在整个生命期间进行自我更新并能将基因传递至子代的唯一成体干细胞。自SSCs移植技术建立以来,有关其分离、鉴定、培养、冻存、转基因操作及移植等方面均已取得长足进步,使人们对其生物学特性有了更深入的了解。根据最近的相关进展,系统评述了SSCs的相关生物学特性,以期为该领域及其他干细胞研究提供借鉴。     

逆转录病毒载体介导的LacZ基因在NIH-3T3细胞中的稳定表达

精原干细胞(SSCs)介导的转基因技术很可能成为制作转基因动物及治疗雄性不育的一条新途径。为了研究逆转录病毒载体介导法转染体外培养SSCs的可行性,用脂质体介导法将携带LacZ基因的重组逆转录病毒载体pLNCL导入包装细胞PA317,用含G418的培养液筛选得到5株稳定转染的产毒细胞。收集这些克隆的产毒上清,过滤后进行倍比稀释,用NIH-3T3细胞通过X-gal染色测定其浓缩前病毒滴度。结果显示,PA3173培养上清中病毒的浓缩前滴度最高,达1.1×103CFU/mL。再将筛选到的稳定转染的NIH-3T3细胞培养至单层,进行X-gal染色检测β-半乳糖苷酶的表达。结果显示,大多数稳定转染的NIH-3T3细胞均为X-gal ,表明这些细胞成功表达了目的基因LacZ。本研究结果为后期工作中用该载体感染体外培养SSCs奠定了基础。     

以支持细胞为饲养层培养小鼠精原干细胞

为探索精原干细胞(Spermatogonialstemcells,SSCs)体外自增殖的条件以及SSCs体外快速扩增的方法,以6-8日龄昆明乳鼠为材料,分离小鼠睾丸细胞,采用Percoll梯度离心法富集SSCs;以经丝裂霉素C处理的Sertoli细胞作饲养层,以DMEM为基本培养基,加入5%胎牛血清和103u/ml的白血病抑制因子(Leukemiainhibitoryfactor,LIF),体外培养SSCs;运用免疫荧光技术,以SSCs特异性表面分子Thy1为标志,对原代培养20d和传代培养14d的细胞进行鉴定。该培养体系下,SSCs贴壁时间为6h-9h,48h后可见细胞分裂,迅速增殖出现在接种12d以后。接种后第20d形成数十至上百个细胞的细胞团,细胞总数比接种时增加了45-245倍,100倍显微镜下观察可见,单位视野内细胞团数为26±4个。传代后细胞增殖较快。原代培养20d和传代培养14d的细胞均为Thy1阳性;而传代20d后,细胞周缘不整,有伪足出现,呈现出死亡迹象。该培养条比较适合SSCs短期快速增殖。     

体外培养条件下SCF、LIF与bFGF对昆明白小鼠精原干细胞增殖的影响

生长因子作为细胞体外培养和在体细胞生长及增殖必需的调节因子 ,一直被广泛的关注。业已证明干细胞因子(ＳｔｅｍＣｅｌｌＦａｃｔｏｒ,ＳＣＦ)、白血病抑制因子 (ｌｅｕｋａｅｍｉａｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｆａｃｔｏｒ,ＬＩＦ)和碱性成纤维细胞生长因子 (ＢｓａｉｃＦｉｂｒｏｂｌａｓｔＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ)具有刺激细胞增殖的作用[1～ 4] ,但大都是对单一因子进行研究。本实验探讨用这三种生长因子的不同组合观察对小鼠精原干细胞增殖的作用 ,以期定性和定量的探讨出体外培养初期三种因子对小鼠精原干细胞生长的影响 ,为小…     

利用生物条形码技术对蓝舌病毒VP7蛋白进行微量检测

目的：建立高灵敏检测蓝舌病毒VP7蛋白的生物条形码检测方法。方法：制备VP7蛋白的多抗及特异DNA链标记的金纳米颗粒探针（NP）和VP7蛋白单抗标记的磁性微球探针（MMP）,形成MMP-VP7蛋白-NP三明治复合物后,再利用去杂交将NP探针上标记的DNA链释放出来,通过PCR或芯片检测方法鉴定释放的DNA链,确定VP7蛋白的存在。结果：建立了蓝舌病毒VP7蛋白的生物条形码检测体系,检测灵敏度可达10fg/mL,为常规ELISA检测的106倍。结论：为发展高灵敏度的蓝舌病毒生物条形码检测试剂盒鉴定了基础。     

睾丸支持细胞对精原干细胞发育的调节

精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是位于睾丸曲精小管基膜上既能自我更新,又能定向分化的一类原始精原细胞.鉴于其独具的生物学特性,SSCs研究在干细胞生物学、医学、畜牧业等领域均具有重要意义,但目前有关其更新、分化的调控机制仍不清楚.干细胞的发育受其外部特定发育环境及其内在因素的综合调控.最近以睾丸支持细胞为主要结构组分的发育环境对SSCs行为的调控研究备受关注且取得快速进展.综合相关报道,主要就哺乳动物睾丸支持细胞对SSCs更新、分化的调节进行了评述,以期为本领域及其他干细胞研究提供借鉴.