虫草提取物对肺纤维化小鼠的抗氧化作用研究

目的：探讨虫草提取物对小鼠肺纤维化过程中脂质过氧化的影响。方法：昆明种小鼠144只,随机分为假手术组、模型组、虫草提取物高、中、低剂量组和醋酸泼尼松组,每组24只。除假手术组外其余各组小鼠采用气管内一次性滴注盐酸博莱霉素,假手术组小鼠气管内一次性滴注等体积生理盐水。造模后第二天开始给药,假手术组和模型组分别灌服等体积的生理盐水。各组动物于7,14,28d随机处死8只,分别观察各组小鼠肺系数、肺组织羟脯氨酸（HYP）、丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性及血清中MDA的含量和SOD的活性,并取固定部位肺组织做病理组织学检查。结果：虫草提取物能明显降低肺纤维化小鼠肺系数和肺组织HYP的含量,并可提高血清和肺组织中SOD的活性,降低血清和肺组织中MDA的含量。病理组织学检查表明,虫草提取物明显改善实验性小鼠肺纤维化。结论：虫草提取物对小鼠肺纤维化具有一定的干预作用,其机制可能与抗脂质过氧化有关。     

RNA干扰技术及其在细胞周期研究中的应用

RNA干扰(RNA interference,RNA i)是由双链RNA(doub le-stranded RNA,dsRNA)引发的转录后基因沉默(posttran-scridptional gene silenc ing,PTGS)。dsRNA经D icer酶降解成21-23nt的siRNA,并以其为模板,特定位点、特定间隔降解与之序列相应的mRNA。随着RNA i机制的深入研究与广泛应用,目前该技术已经普遍应用于细胞周期研究中,在阐明各种调控机制的同时也为基因治疗提供了新靶点。     

重组牛肠激酶轻链基因在大肠杆菌中的表达与纯化

肠激酶（Enteroloinase,EK,EC3.4.21.9）是一种以异源二聚体形式存在于哺乳动物十二指肠内的丝氨酸蛋白酶,通过在位点（Asp）4-Lys的羧基端进行高效特异酶切,将胰蛋白酶原激活为胰蛋白酶。以GenBank公共数据库中牛肠激酶轻链基因序列（Accession No.NM174439）设计引物,利用RT-PCR方法合成牛肠激酶轻链基因片段,并克隆进pET39b载体中DsbA片段的C’端,转化大肠杆菌BL21（DE3）,获得DsbA/牛肠激酶轻链融合蛋白,经镍离子螯合层析纯化,每升培养液中可得到2.7-3.0mg重组牛肠激酶,对含有肠激酶酶切位点的IL-11/MBP融合蛋白进行酶切,结果表明,酶解率可达到95%以上,为重组牛肠激酶的大规模生产打下了基础。     

毛茛有效部位D1对人胃癌细胞MGC803细胞增殖和凋亡的作用及其机制的初步研究

采用AlamarBlue和瑞-姬氏染色方法检测毛茛有效部位D1对人胃癌细胞MGC803增殖的作用;PI染色法观察D1对MGC803细胞周期的影响;半定量RT-PCR法检测D1对MGC803细胞周期相关基因表达的作用;用DAPI染色方法和细胞色素C免疫荧光法观察D1对胃癌细胞MGC803凋亡的影响。结果显示,毛茛有效部位D1对胃癌细胞MGC803表现出较好的增殖抑制作用,且24、48和72 h的半数抑制浓度分别为126.89、74.81、68.72μg/mL;同时D1对细胞周期和周期相关基因的表达无明显影响,且D1能促使细胞色素C释放到细胞胞浆诱导细胞凋亡。     

重组牛肠激酶轻链基因在毕赤酵母中的表达与纯化

目的:构建重组牛肠激酶轻链的基因工程菌,并进行表达和纯化,以获得高纯度和高活性的重组牛肠激酶轻链蛋白。方法:以GenBank公共数据库中的牛肠激酶轻链基因序列(AccessionNo.NM174439)设计引物,利用RT-PCR合成牛肠激酶轻链基因片段,并克隆进pPIC9K载体,同时在基因N端插进6个组氨酸标签,转化毕赤酵母GS115,进行筛选和诱导表达。产物经镍离子螯和层析和Q-SepharoseFF柱纯化,并酶切融合蛋白检测其活性。结果:培养液中重组牛肠激酶轻链蛋白表达量为3.0mg/L。对含有肠激酶酶切位点的IL-11/MBP融合蛋白进行酶切,结果表明,酶解率可达到90%以上。结论:表达并获得了高纯度的重组肠激酶轻链蛋白,为大规模生产打下了基础。