应用旋转生物反应器培养小鼠胚胎干细胞的初步研究

目的 应用旋转生物反应器(RCCS)和微载体培养体系尝试建立一种实现批量培养干细胞的新方法.方法 应用RCCS和微载体培养体系对小鼠胚胎干细胞(mESCs)进行体外培养扩增,定期收集细胞样品,镜下观察mESCs在RCCS生长的形态特征,并定量绘制细胞生长曲线,利用MATLAB软件计算细胞生长参数并对照平面培养体系,利用H&E染色、免疫荧光及RT-PCR技术对RCCS内培养的mESCs的细胞形态,未分化标志蛋白(SSEA-1)和标志基因(oct-4)的表达进行定性或半定量分析.结果 mESCs可在RCCS内以贴附于微载体表面的形式实现三维生长,其生长增殖状态良好,且伴随培养时间的延长,SSEA-1蛋白及oct-4 基因的表达水平逐渐降低.这表明RCCS内培养扩增的mESCs逐渐走向分化,该分化进程同步于平面对照培养体系.结论 RCCS可以为mESCs的体外规模化扩增培养提供良好的培养体系.     

黄河三角洲耐盐真菌Penicillium chrysogenum HK14-01的次生代谢产物

【目的】从黄河三角洲耐盐微生物的代谢产物中寻找具有抗菌和抗肿瘤活性的化合物。【方法】应用化学与生物活性相集成的筛选方法,从耐盐微生物中筛选获得代谢产物丰富并具有生物活性的目标菌株;通过高盐胁迫目标菌株,利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱和高效液相色谱等方法对发酵产物进行分离、纯化,运用波谱解析、钼靶X-射线单晶衍射分析、圆二色散谱(CD)和密度泛函数(DFT)-ECD的计算鉴定化合物的结构。【结果】从采自黄河三角洲的泥土样品中得到一株耐盐真菌HK14-01,鉴定为产黄青霉Penicilliumchrysogenum;从其发酵产物中分离鉴定了8个化合物:(2S,3R)-oxaline(1,主产物)、(3R,4R)-3,4,8-trihydroxy-3,4-dihydronaphthalen-1(2H)-one(2)、(Z)-N-(4-hydroxystyryl)formamide(3)、(E)-N-(4-hydroxystyryl)formamide(4)、emodin(5)、4-(2-hydroxyethyl)benzene-1,2-diol(6)、methyl 2-(4-hydroxyphenyl)acetate(7)和2-(4-hydroxy phenyl)acetonitrile(8);化合物1、3和4对大肠杆菌以及化合物1和5对金黄色葡萄球菌表现出抑菌活性,化合物5对P388细胞表现出微弱的细胞增殖抑制活性。【结论】首次确定了化合物2的绝对构型、首次报道了化合物1和2的CD数据;从黄河三角洲的耐盐微生物的次生代谢产物中可以得到活性化合物,这一区域的耐盐微生物资源值得深入研究。     

低聚木糖的提取工艺及相对分子质量分布

通过单因素试验和正交试验研究低聚木糖的提取条件,使用凝胶树脂对低聚木糖粗提液进行分离,采用高效液相色谱法测定了低聚木糖的相对分子质量分布。低聚木糖的最佳提取条件:在底物质量浓度为100 g/L的情况下,加酶量1 000 U/g,酶解温度55℃,提取时间为4 h。在此条件下,提取的平均聚合度为3.12,高效液相色谱测定结果发现,低聚木糖主要是由木二糖、木三糖以及4～8个聚合度的糖组成。     

杨潜叶蜂生活史及防治的初步研究

<正> 杨潜叶蜂Messa hcrticulana Kl,属膜翅目叶蜂科(Tenthredinidae)。由于幼虫为害杨树,且潜叶为害,故名杨潜叶蜂;又因为被害叶片潜痕部分充满空气,呈泡状,为与近缘种区别,所以亦称杨泡叶蜂。幼虫潜伏于杨树叶片上下表皮之间蛀食叶肉,随着幼虫的生长发育,潜痕也日益扩大,一般可占整个叶片面积的3/5—4/5,致使叶片失去正常营造养分的功能;更为严重的是常常造成叶片早期脱落,严重影响树木的生长。此虫为害的另一个特点是为害时间早,也就是在杨树生长发育的关键时期,使杨树     

杨干象虫的生物学和防治

杨干象虫是杨树的毁灭性害虫,严重为害3年生以上的幼树,近年来在东北已蔓延成灾。在东北只为害杨柳科植物,其中以中东杨和加拿大杨被害最重,但小青杨×加拿大杨的杂种场有强度抗性作用,可供选择树种参考。杨干象虫在辽宁一年一代,以初龄幼虫、卵和成虫越冬。成虫在无风和高湿高温条件下可以飞行。将卵产于寄主的木栓层内.每头雌虫平均产卵44粒,产卵期平均36.5日。卵期2—3周,蛹期平均10日。成虫寿命较长,雄虫平均63日,雌虫平均85.5日。 应用白僵菌防治幼虫试验表明,往杨干象虫幼虫坑道口喷射每毫升含孢子18—20亿或9—10亿的白僵菌液,均可收到良好的防治效果。     

RNAi特异性抑制A20基因对H2O2诱导的HUASMC细胞表型的影响

目的:通过采用锌指蛋白A20基因干扰技术观察其对H2O2诱导的人脐动脉血管平滑肌细胞(HUASMC)超微结构影响,以初步研究锌指蛋白A20在氧化还原方面对细胞的保护作用.方法:将培养的人脐动脉血管平滑肌细胞随机分六组,空白组;A20siRNA组;scramble siRNA组;H2O2组;H2O2+A20siRNA组;H2O2+scramble siRNA,采用RT-PCR,Western-blotting方法观察A20基因表达变化,应用透射电镜观察细胞超微结构改变.结果:空白组A20mRNA与蛋白有微弱表达,A20siRNA组较空白组表达减少(P＜0.05);H2O2组A20mRNA与蛋白表达明显高于空白组但显著低于H2O2+A20siRNA组(P＜0.05)干扰效率大约55%.空白组平滑肌细胞(VSMC)电镜下呈典型的"收缩表型";H2O2组VSMC表型发生明显改变,呈"合成表型"H2O2+A20siRNA组成典型的合成表型且肌丝明显减少,细胞器及分泌物增多.结论:A20基因可以抑制H2O2损伤诱导的血管平滑肌细胞表型转化.     

心功能不全大鼠心脏α_1－肾上腺素受体亚型的变化

本文通过主动脉和左肾动脉缩窄复制心功能不全大鼠模型，并采用放射配基结合实验和半定量逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），从蛋白质和基因转录水平上观察在心功能不全时大鼠心脏α１－肾上腺素受体三种亚型的改变。Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析结果显示，在心功能不全组与对照组，大鼠心脏组织１２５Ｉ－ＢＥ与α１－肾上腺素受体结合的亲和性（２２９±３２与１９５±１５ｐｍｏｌ／Ｌ）和数量（１０２±１２与９６±１７ｆｍｏｌ／ｍｇ）均无显著差异。但ＷＢ４１０１对１２５Ｉ－ＢＥ的竞争性抑制实验显示在心功能不全组高亲和性位点所占百分比较对照组显著增高（５１±７％与２２±５％）。ＲＴ－ＰＣＲ的结果显示，在心功能不全大鼠心脏α１Ａ－ＡＲ的ｍＲＮＡ水平高于对照组，但α１Ｂ－ＡＲ的ｍＲＮＡ水平低于对照组，而α１Ｄ－ＡＲ的ｍＲＮＡ水平在两组之间没有显著差异。综合上述结果可知，在心功能不全大鼠，心脏α１Ａ－ＡＲ增加，α１Ｂ－ＡＲ下降，而α１Ｄ－ＡＲ则没有显著改变。