紫草素通过促进硫氧还蛋白互作蛋白的表达抑制黑素瘤细胞对葡萄糖的摄取

目的:检测紫草素对黑素瘤细胞的增殖和葡萄糖摄取的调控,及其对硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)表达的影响。方法:利用MTT实验检测紫草素对A375细胞和SK-MEL-28细胞增殖能力的影响;利用流式细胞术检测A375细胞和SK-MEL-28细胞对葡萄糖类似物2-NBDG的摄取能力;分别利用real-time PCR和Western印迹检测紫草素对TXNIP mRNA和蛋白表达的影响。结果:紫草素可通过剂量依赖的方式抑制A375和SK-MEL-28细胞的增殖及其对2-NBDG的摄取能力;紫草素可促进TXNIP的mRNA和蛋白的表达。结论:紫草素可抑制黑素瘤细胞的增殖和葡萄糖的摄取过程,可能是通过对TXNIP基因的表达调控来实现的。     

Sp1基因RNA干扰载体的构建及鉴定

目的：构建干扰载体pSilencer3.1-Sp1,并初步研究其对Sp1基因的干扰作用。方法：根据Sp1cDNA编码序列,设计并合成针对Sp1基因的特异性RNA干扰片段,并将其克隆入pSilencer3.1-H1neo干扰载体中,构建Sp1基因小干扰RNA（siRNA）真核表达载体pSilencer3.1-Sp1;分别将阴性对照载体pSilencer3.1与重组载体pSilencer3.1-Sp1经脂质体LipofectAMINE2000介导转染HeLa细胞,采用RT-PCR、Western blot方法分别检测Sp1基因的转录与表达水平。结果：构建了Sp1基因siRNA真核表达载体pSilencer3.1-Sp1,经酶切、测序鉴定证实克隆正确,并在mRNA水平和蛋白水平证实了载体的干扰效果。结论：特异性siRNA能明显抑制Sp1基因在HeLa细胞中的表达,为进一步研究Sp1的生物学功能和作用机制奠定了实验基础。     

Spl基因RNA干扰载体的构建及鉴定

目的:构建干扰载体pSilencer 3.1-spl,并初步研究其对Spl基因的干扰作用.方法:根据Spl cDNA编码序列,设计并合成针对Spl基因的特异性RNA干扰片段,并将其克隆入pSilencer 3.1-Hl neo干扰载体中,构建Spl基因小干扰RNA(siRNA)真核表达载体pSilencer 3.1-Spl;分别将阴性对照载体pSilencer 3.1与重组载体pSilencer 3.1-Spl经脂质体LipofectAMINE2000介导转染HeLa细胞,采用RT-PCR、Western blot方法分别检测Spl基因的转录与表达水平.结果:构建了Spl基因siRNA真核表达载体pSilencer 3.1-Spl,经酶切、测序鉴定证实克隆正确,并在mRNA水平和蛋白水平证实了载体的干扰效果.结论:特异性siRNA能明显抑制Spl基因在HeLa细胞中的表达,为进一步研究Spl的生物学功能和作用机制奠定了实验基础.     

谷氨酰胺酶1在结肠癌中的表达及其对细胞代谢重编程的影响

目的:检测谷氨酰胺酶1(GLS1)在结肠癌和癌旁组织中的表达,并观察干涉GLS1对结肠癌细胞代谢重编程的影响。方法:利用免疫组织化学实验观察50例结肠癌组织芯片中GLS1的表达状态,并进行统计学量化分析;利用siRNA干涉HT29细胞和Caco2细胞中的GLS1后,通过MTT实验、葡萄糖摄取实验和谷氨酰胺摄取实验检测其对细胞生物学行为的影响。结果:GLS1在结肠癌中显著高表达;干涉GSL1后,细胞增殖能力、对葡萄糖和谷氨酰胺的摄取能力均显著下降。结论:GLS1在结肠癌组织中高表达,并且影响细胞对葡萄糖和谷氨酰胺的摄取能力。     

肿瘤相关巨噬细胞在肿瘤免疫治疗中的意义和研究进展

肿瘤相关巨噬细胞(TAM)在肿瘤间质中占有很大比例,具有不同于炎症反应中巨噬细胞的表型和功能。在不同刺激因子作用下,TAM可以分化为具有抑制肿瘤活性的M1型巨噬细胞和具有促进肿瘤活性的M2型巨噬细胞。肿瘤组织中的TAM主要为M2型,它们促进肿瘤的发生、发展、侵袭和转移。特定的刺激可将M2型TAM逆转为M1型TAM而抑制肿瘤生长,这将为肿瘤免疫治疗提供新思路。我们简要综述肿瘤相关巨噬细胞在肿瘤免疫治疗中的研究进展。     

糖代谢重编程在肿瘤上皮-间质转变过程中的生物学意义

上皮-间质转变(epithelial to mesenchymal transition,EMT)即成熟组织中的上皮细胞转变成具有迁移能力的间质细胞,该过程在恶性肿瘤的侵袭和转移过程中发挥重要作用。随着肿瘤的发生发展,细胞在恶性转变的同时往往会发生代谢方式的重编程,从依赖线粒体氧化磷酸化产生ATP的代谢方式转变为通过糖酵解途径吸收和利用葡萄糖。本文主要对肿瘤糖代谢重编程与细胞EMT转变关系的研究进展进行了综述。     

PBL教学法在研究生分子生物学实验课程中的应用分析

研究生教育是我国培养高素质人才的重要环节。在医学院校,分子生物学实验课程作为衔接理论知识与实际应用的纽带,对研究生的临床实践、科学研究能力的培养具有重要意义。我们在多年教学经验的基础上,在研究生实验课程中引入了PBL(problem based learning)教学模式,以提出科学问题的方式,将实验中涉及到的质粒DNA提取、核酸电泳、蛋白印迹、细胞转染等分子生物学实验技术进行整合,增加了学生学习的热情,同时锻炼并培养了学生的提出问题、解决问题的科研思维能力。