3,5-二氯苯基双胍抑制黑色素瘤肺转移的裸鼠体内药效学研究

目的 确认整合素αvβ3新型抑制剂3,5-二氯苯基双胍对人黑色素瘤肺转移的抑制作用.方法 应用前期建立的人黑色素瘤裸鼠肺转移模型,观察3,5-二氯苯基双胍的治疗效果.裸鼠尾静脉接种黑色素瘤细胞(第1天)后,于第5、9、13、17和21天给予该药物治疗.50 d实验结束,处死裸鼠并取完整的肺组织,Bouin氏液固定24 h后根据肺表面癌结节的大小和数量给予评分,以此评价肺转移的程度.结果 3,5-二氯苯基双胍6、12 mg/kg和24 mg/kg治疗组的转移分数分别为(55.25±13.60)、(35.13±17.36)和(12.83±11.44),与溶剂对照组(转移分数是82.50±17.72)相比具有明显差异(P＜0.05).阳性对照组的转移分数为(11.50±10.44)(P＜0.05 vs 溶剂对照组),阴性对照组和PBS对照组的转移分数分别为(88.50±17.21)、和(88.87±11.29) (P ＞0.05 vs溶剂对照组).结论 3,5-二氯苯基双胍在裸鼠体内能够明显抑制黑色素瘤肺转移,并呈现一定的剂量依赖性.     

人黑色素瘤细胞裸鼠肺转移模型的建立

目的建立整合素αvβ3高表达的黑色素瘤细胞肺转移模型。方法通过将不同数目的M21细胞经尾静脉接种裸鼠,适时处死后计数肺表面癌结节。通过实时定量PCR和明胶酶谱的方法比较肺转移灶细胞与亲代M21细胞差异。结果M21细胞1×10^6、2×10^6、5×10^6尾静脉接种裸鼠,均能形成肺转移灶,癌结节数目均值分别为：84±8、70±6、88±12,三组之间没有明显差异,阴性对照组未形成转移灶。M21肺转移灶细胞与亲代细胞相比,增殖增快,MMP-2活性增高,整合素αv和β3mRNA表达水平明显增高。结论M21细胞1×10^6经尾静脉接种裸鼠50d内即可100%成瘤。M21肺转移灶细胞具有更快的增殖能力,整合素αvβ3和MMP-2表达水平明显增高。本实验建立了稳定的肺转移模型,为黑色素瘤和整合素αvβ3的研究提供重要的动物模型。     

槲皮素对人脑胶质瘤干细胞生物学行为及miR-29s家族的影响分析

目的探讨分析槲皮素对人脑胶质瘤干细胞(BGSCs)生物学行为及miR-29s家族的影响。方法使用干细胞培养液对U87人脑胶质瘤细胞进行培养,采用CCK-8法检测槲皮素对BGSCs细胞增殖抑制率,采用流式细胞技术检测槲皮素对BGSCs细胞凋亡影响,并采用real-time PCR鉴定槲皮素对BGSCs细胞中miR-29a、miR-29b以及miR-29c表达的影响。采用t检验以及方差分析进行统计学分析。结果随着槲皮素浓度的增加,BGSCs细胞增殖抑制率增加24 h 0μg/ml(0.00±0.12)﹪、10μg/ml(1.36±0.38)﹪、20μg/ml(15.33±3.01)﹪、40μg/ml(29.50±4.57)﹪、80μg/ml(40.21±6.42)﹪、160μg/ml(61.21±7.48),F=76.273,P 0.05;48 h 0μg/ml (0.09±0.05)﹪、10μg/ml(9.84±2.17)﹪、20μg/ml(28.57±3.84)﹪、40μg/ml(43.59±5.21)﹪、80μg/ml(59.50±3.28)﹪、160μg/ml(70.21±9.48)﹪,F=85.392,P 0.05,且同浓度槲皮素作用48 h对BGSCs细胞增殖抑制率高于作用24 h(P 0.05)。随着槲皮素浓度的升高,BGSCs细胞凋亡率升高[0μg/ml(13.42±1.21)﹪、20μg/ml(38.47±9.28)﹪、40μg/ml(59.34±7.20)﹪、80μg/ml(71.42±9.47)﹪,F=57.493,P 0.05]。不同浓度槲皮素处理BGSCs细胞后,可促进BGSCs细胞miR-29s家族miR-29a/b/c相对表达量,且随着槲皮素浓度的增加,BGSCs细胞miR-29s家族相对表达量增加[miR-29a 0μg/ml(1.04±0.08)、20μg/ml(1.16±0.05)、40μg/ml(1.30±0.10)、80μg/ml(1.41±0.09),F=19.281,P 0.05;miR-29b 0μg/ml(1.06±0.09)、20μg/ml(1.13±0.05)、40μg/ml(1.25±0.07)、80μg/ml(1.30±0.09),F=13.427,P 0.05;mi R-29c 0μg/ml(1.03±0.07)、20μg/ml(1.15±0.03)、40μg/ml(1.22±0.06)、80μg/ml(1.31±0.08),F=14.502,P 0.05]。结论槲皮素可有效抑制人脑BGSCs增殖,促进人脑BGSCs凋亡,并促进人脑BGSCs中miR-29s家族表达。