通过替代失活的方法分析核酸片段在肺炎链球菌毒力中的作用

目的鉴定基因spd—ABC、spd-1672、sp-1673和长间隔序列spd—J在肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,S．pn）毒力中的作用。方法采用长臂同源聚合酶链反应（LFH—PCR）的方法分别构建这4个序列的红霉素抗性基因（erm）替代缺失突变体,通过PCR和测序鉴定是否构建成功;通过绘制生长曲线观察基因对细菌生长繁殖的影响,通过小鼠毒力实验观察基因对细菌致病性的影响。结果所构建缺陷菌目的基因由eFm基因完全替代;spd—ABC、spd-1673和长间隔序列spd—J3个片段缺陷菌的生长趋势与野生菌没有明显差异,生长大约5hA值均可达到峰值,而spd-1672缺陷菌出现明显的延迟现象,生长8h后其4值才达到最高值;野生菌与缺失spd—ABC、spd-1673和长间隔序列spd—J的缺陷菌感染小鼠各组半数死亡时间分别为19、22、24和24h,差异无统计学意义,而spd-1672缺陷菌感染小鼠的半数死亡时间在75h左右,显著长于野生菌感染小鼠组（P〈0．05）。结论在构建的4个单个基因缺失突变体中,spd-1672缺陷后．S．pn生长明显延迟,毒力显著下降,提示spd-1672是s-Pn的一个新的毒力因子。