蟾蜍红细胞与网织红细胞染色质蛋白的比较研究 Ⅱ.组蛋白

从蟾蜍成熟红细胞与网织红细胞分离纯化了总组蛋白,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定证明在正常或贫血的蟾蜍红细胞内都具有细胞特异的组蛋白H_(50)。在蟾蜍贫血后,网织红细胞内的组蛋白H_1有显著增加。用Bi0-gel P60将总组蛋白进一步柱层分离,并对组蛋白H_1与H_5含量的比值作了分析,证明蟾蜍成熟红细胞与网织红细胞内组蛋白H_1与H_5在量的比例上有明显的变化。     

蟾蜍红细胞与网织红细胞染色质蛋白的比较研究——Ⅰ、非组蛋白蛋白质

从亚洲蟾蜍(Bufo bufo asiaticus)的成熟红细胞与网织红细胞中分离纯化了染色质非组蛋白(NHP),并在体外转录系统中比较了两类细胞的NHP对RNA合成的激活作用。实验结果表明:从网织红细胞中分离获得的NHP只能部份恢复被网织红细胞组蛋白抑制的模板活力,而成熟红细胞的NHP不仅能恢复被成熟红细胞组蛋白抑制的模板活力,而且还能恢复被网织红细胞组蛋白抑制的模板活力。此外,从聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱中也观察到这两类细胞的NHP的差异。     

酶(DNA聚合酶Ⅰ的克林诺夫片段)促合成Polyd(G-C)_n

本实验运用遗传工程菌株Pcj155高效表达的DNA聚合酶Ⅰ成功地合成左旋Z-DNA的重要材料polyd(G-C)_n。迄今为止,尚未发现有关这方面成功的报道。该酶的产量比国外报道的大肠杆菌和小球菌DNA聚合酶Ⅰ的产量高100倍以上。同时发现60—85％硫酸铵沉淀的酶(纯化部分Ⅲ)合成多聚脱氧核     

树突状细胞与CIK细胞共培养诱生的DCCIK细胞群对肿瘤的杀伤作用

由树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的同源杀伤细胞(CIK)的共培养诱生的细胞群(DCCIK)对肿瘤细胞的细胞毒活性的研究。DCCIK细胞体外杀伤肿瘤靶细胞A549(MTT法),效靶比为10∶1、5∶1时杀伤率分别为61%、52%。DCCIK细胞诱导培养3周后,效靶比为10∶1、5∶1时杀伤率分别为64%和56%。数据亦表明DCCIK细胞对靶细胞的杀伤优于CIK细胞。动物体内实验分荷瘤A549、BEL7404和A375三组,每组分(A)DCCIK 化疗、(B)单用化疗。治疗20天、35天后测量各组肿瘤消失率。结果显示:DCCIK 化疗的抑瘤效果明显好于单纯化疗。提示DCCIK细胞有临床应用前景。     

梧桐花粉致敏大鼠动物模型的建立及特异性抗体检测

用梧桐花粉浸液作为过敏原,经皮下多点注射对实验动物进行免疫,用雾化的梧桐花粉浸液进行激发,建立了变态反应性疾病的实验动物模型。随后通过ELISA、Western印迹等方法对其血清中的梧桐抗原特异性IgG、IgE进行检测。结果显示有特异性IgG、IgE抗体的存在。     

表皮生长因子受体为靶向重组T7噬菌体抗肿瘤疫苗的构建及免疫活性

利用RT-PCR技术从人A431细胞中克隆表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)基因N端序列,经测序鉴定正确。将膜外序列不同功能及模拟抗原呈递较佳的亚克隆DNA片段插入T7噬菌体表达载体,从而构建了重组T7噬菌体抗肿瘤疫苗并用于动物免疫注射,用斑点印迹(dotblot)和MTT法分别检测到特异性抗体和细胞毒性T淋巴细胞反应。结果显示,以噬菌体颗粒为载体的疫苗可以诱导体液免疫反应和细胞免疫反应。     

大鼠和小鼠睾丸表皮生长因子表达的免疫组织化学定位观察

为了了解大鼠和小鼠睾丸是否产生ＥＧＦ及其细胞定位,本实验用ＥＧＦ单克隆抗体对大鼠和小鼠睾丸进行了免疫细胞化学定位研究,结果显示：（１）出生后,大鼠和小鼠睾丸即开始产生ＥＧＦ,分泌活动主要位于睾丸间质细胞。（２）至性成熟期,少数精原细胞、精母细胞及个别圆形精子细胞和管周肌样细胞也产生ＥＧＦ,使生精小管尤其是血睾屏障管腔小室侧的ＥＧＦ分泌增加。（３）在本实验中,睾丸支持细胞未见明显ＥＧＦ阳性染色。结果表明,大鼠和小鼠睾丸是可以产生ＥＧＦ的,间质细胞是其主要的ＥＧＦ分泌细胞。进入性成熟期后,少数精原细胞、精母细胞及个别圆形精子细胞和管周肌样细胞也产生ＥＧＦ。大鼠和小鼠睾丸在发育过程中ＥＧＦ分泌量呈上升趋势,至性成熟期达分泌高峰     

EGFR基因重组T7噬菌体疫苗抗Lewis肺癌的实验研究

本研究中制备了表达表皮生长因子受体（EGFR）部分肽段的基因重组T7噬菌体疫苗,并开展了诱导小鼠产生内源性抗EGFR抗体的实验性抗肿瘤作用研究。由T7噬菌体展示系统将7个经筛选的异种属（人源、鸡源）EGFR膜外区片段展示在其壳体次要头蛋白（P10B）上,用所制备的基因重组噬菌体疫苗免疫小鼠,免疫4W后皮下接种Lewis肺癌细胞,10d后分离瘤体并称重,观察各实验组的抗肿瘤效果。WesternBlot检测重组的融合壳蛋白均有EGFR抗原性：高表达EGFR的A431细胞与免疫3W的小鼠抗血清结合并被荧光二抗标记．流式细胞仪检测法确认有抗EGFR抗体产生;各实验组肿瘤均重统计结果显示,P—CL1—670组、P—cp1-130组、P—cp2—136组、P—cp3—145组、P—cp4—142组与空白噬菌体组差异性显著。说明表达EGFR的基因重组噬菌体疫苗诱导产生的内源性抗体,在一定程度上抑制了EGFR阳性肿瘤的生长,为诱导型内源性抗EGFR抗体的肿瘤靶向治疗研究开辟了新的途径。     

DCIK细胞用于肺癌临床免疫治疗

观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK 细胞)和同源树突状细胞(DC)共培养后,共培养细胞树突状细胞调节的细胞因子诱导的杀伤细胞(DCIK 细胞)体外细胞毒活性,并观察DCIK细胞治疗肺癌的近期临床疗效、免疫学活性及副反应.收录 12例确诊肺癌经标准治疗方案治疗的患者,取外周血分离单个核细胞(PBMC),体外诱导出DC和CIK细胞共培养后,观察DCIK细胞表型,用MTT法测体外细胞毒活性;当效靶比为20∶1、10∶1时,DCIK细胞体外细胞毒活性杀伤率分别为55%、46.2%.所有患者均接受一定剂量的 DCIK细胞过继免疫治疗,观察其近期临床疗效、免疫反应、不良反应.12例患者中完全缓解 1例,部分缓解4例,病情稳定1例,近期有效率为41.6%,疾病控制率为50%,病情进展共6例,其中死亡2例.与DCIK细胞回输前相比,患者CD4 、CD8 、CD56 均有明显的升高(P＜0.05),这表示可以诱导患者产生特异性的免疫反应.除两例患者出现一过性的发热外,其余患者基本无不良反应.DCIK细胞在肺癌免疫治疗中能诱导机体产生特异性的免疫反应,亦是新的杀伤肿瘤细胞的效应细胞,有较好的临床疗效.