产角质酶酵母菌的发现与鉴定及产酶条件的优化

为得到有效水解杜仲角质层的角质酶,通过生物酶法提取杜仲中的活性成分。从病变的杜仲叶中分离出一株能高产角质酶的菌种,鉴定分析证实该菌株是胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa),这是首次从植物病原真菌以外发现产角质酶的酵母菌,并对该菌株发酵产角质酶的条件进行优化。这一发现意义重大,因为酵母菌比植物病原菌安全许多,更利于大规模生产。     

草鱼肠道cDNA文库构建及部分ESTs分析

本项研究以雌性草鱼肠道为实验材料,采用非均一化的Oligo-dT引物定向克隆技术构建了草鱼肠道组织的cDNA文库,对文库质量的分析结果表明：cDNA文库的库容量至少为2．3×10^5,重组率达95％,平均插入片断长度大于1000bp。挑取cDNA克隆进行5’端测序,总共进行了1571个成功反应,其中1411条ESTs长度大于100bp,初步拼接得到939个单基因簇（Unigene）,其中包括188个重叠群（Contigs）,751个单拷贝EST（Singletons）。使用BLAST软件将这些序列同GenBank等数据库进行比对、查询和注释,结果显示418条序列有相关同源性,其他的521（55．5％）条序列没有明显的同源性（E-valu≤1．00E-10）,但是也同时揭示出在这些ESTs中能够发现新功能基因的相当可能性。本研究结果对草鱼以及其他鲤科鱼类的消化系统功能基因的筛选和发现具有指导意义。此外,草鱼肠道cDNA文库的构建和EST测序工作将为草鱼基因组计划的实施奠定基础。     

酶水解杜仲纤维素细胞壁及长丝杜仲胶的提取

绝大多数现有的杜仲胶提取方法都需要将杜仲皮和杜仲叶粉碎,降低了杜仲胶的弹性、韧性、抗拉强度.为了获得长丝杜仲胶,研究了纤维素酶对杜仲纤维素细胞壁水解、杜仲叶表面的角质层的去除以及长丝杜仲胶的提取.发现1%氢氧化钠在70 ℃条件下能除去杜仲叶表面阻挡纤维素酶作用的角质层,石油醚是一种十分理想的提取杜仲胶的溶剂.纤维素酶在pH为4时,50 ℃条件下能充分地水解纤维素细胞壁,提高了细胞的通透性,使得石油醚(60～90 ℃)可溶解出高聚合度的长丝杜仲胶,并且使杜仲胶的回收率由原来的2.5%提高了3%以上,拉伸强度也由粉碎样的0.02 MPa提高到60.5 MPa,断裂伸长率由～0%提高到24%,撕裂强度由0.5 kN/m提高到36 kN/m.活性碳能很好地回收石油醚中所溶解的脂溶性天然化学成分,提高了溶剂循环使用的溶解能力.     

杜仲叶多糖的提取分离、抗补体活性及结构研究

经石油醚脱脂、除胶后,采用热水提取、分步醇沉工艺获得杜仲叶水溶性多糖PsEUL1、PsEUL2、PsEUL3,分别经S-8大孔树脂脱色,Sevag法脱蛋白及透析,其中PsEUL1经DEAE-52纤维素柱层析分离得多糖组分PsEUL11、PsEUL12、PsEUL13,抗补体活性实验表明,其中有多个组分有不同程度的抗补体活性,并呈一定的剂量效应关系。活性多糖PsEUL13经硫酸-咔唑反应及气相色谱法测定,单糖组成为:L-鼠李糖、D-岩藻糖、D-阿拉伯糖、D-木糖、D-葡糖糖、D-半乳糖、糖醛酸,含量比为11.8∶1.6∶37.7∶4.2∶10.7∶12.8∶21.2。     

不同方法提取杜仲中桃叶珊瑚苷等4种高活性成分的比较研究

为研究生物化学方法对杜仲中高活性成分的提取率,本文以高效液相色谱法检验样品中提取出活性成分的含量差异,比较了在相同条件下酶解法、水提法、醇提法对杜仲树皮中桃叶珊瑚苷、京尼平苷、京尼平苷酸与绿原酸这4种活性成分的提取量,并对4种活性成分的不同提取效果进行了比较研究。结果发现三种方法的提取量存在明显差异,其中桃叶珊瑚苷提取量为:酶解法22. 42μg/g,水提法8. 27μg/g,醇提法9. 13μg/g;京尼平苷提取量为:酶解法77. 89μg/g,水提法33. 19μg/g,醇提法7. 76μg/g;京尼平苷酸提取量为:酶解法110. 05μg/g,水提法36. 63μg/g,醇提法47. 40μg/g;绿原酸提取量为:酶解法345. 35μg/g,水提法118. 85μg/g,醇提法172. 04μg/g,即酶解法提取量均比水提法、醇提法高出数倍。实验表明酶解法是3种方法中提取效果最好的,且无化学污染。     

一种可止血的富血小板血浆壳聚糖/丝素蛋白多孔伤口敷料的制备及性能表征

为了进一步提高伤口敷料的止血性能,文中在生物相容性良好的壳聚糖溶液中引入含有多种生长因子的人源性富血小板血浆(Humanplatelet-richplasma,hPRP),并加入不同体积比例(1∶1、1∶3、3∶1、1∶0)的丝素蛋白溶液以提高材料的多孔性与止血性,通过冷冻干燥法制备不同配比的hPRP-壳聚糖/丝素蛋白敷料,并将纯壳聚糖敷料作为对照组,研究hPRP和丝素蛋白对敷料的止血性能的影响以及丝素蛋白对PRP中生长因子控制释放的影响。结果表明,在壳聚糖敷料中引入hPRP对敷料的止血性有所提高,但对敷料的多孔结构及吸水率无明显改善,若在hPRP-壳聚糖溶液中按照体积比为1∶1的比例加入丝素蛋白溶液,会得到具有较为均匀的多孔结构的敷料,敷料的孔隙率与吸水率分别可达到86.83%±3.84%与1 474%±114%,且该比例的敷料在快速止血性能上表现优异。此外,加入丝素蛋白与壳聚糖比例为1∶1的PRP敷料能有效减少PRP中生长因子在初始阶段的爆裂释放。因此,含hPRP的壳聚糖/丝素蛋白复合敷料有望成为一种能快速止血且能促进伤口愈合的新型伤口敷料。     

不同温度条件下溶剂循环溶解-析出提取杜仲胶

在杜仲树中杜仲胶以晶体微粒的形式存在,必需用溶剂提取或机械破坏植物组织来获取。虽然溶剂法的效率更高,但溶剂的消耗量大,污染环境严重。我们的研究发现,杜仲胶在热的石油醚中（约80℃）有很高的溶解度,冷却到40℃时有胶丝析出,当温度降到-20℃以下,杜仲胶几乎能较完全从石油醚中析出,回收的溶剂可继续用于下一次杜仲胶的提取,溶剂可循环使用。由于其他杂质仍以溶解态保留在溶剂中,回收的杜仲胶纯度高。此外,整个实验方法的溶剂损失少,对环境的污染小,制备方法简便。