从蚯蚓中联合提取抗氧化酶SOD、CAT的方法研究

本研究采用闪式提取技术,固液比为1:4(m/V)的2.5 mmol/L pH 7.0磷酸缓冲液,提取转速5500 rpm,提取时间2 min,从蚯蚓体内提取出SOD、CAT,并通过羧甲基纤维素CM-22离子交换层析实现SOD和CAT的联合提取分离,SOD、CAT的活性回收率分别达到88.23%和69.5%。在纯化工艺中经过丙酮沉淀和柱层析技术得到蚯蚓SOD纯品,比活达到9352 U/mg,产物在SDS-PAGE上为单一条带,其亚基分子量约为17 kD;通过柱层析纯化了蚯蚓CAT,比活达到22606 U/mg。     

文冠果一、二年生植株根系内生菌的分离、鉴定和固氮活性

该文对文冠果(Xanthoceras sorbifolia)根系内生菌的种类和固氮活性进行了首次报道。试验以田间栽培的文冠果一、二年生植株为材料,以Ashby和YMA为培养基,对根系内生菌进行了分离,通过对菌落形态的观察,划线挑取单菌落培养,并对7个代表性的单菌落进行扩大培养,提取其DNA,采用细菌16S rDNA通用引物序列进行PCR扩增,胶回收、测序后,进行Blast比对分析。试验结果表明:YMA培养基上的菌落数量和种类均明显多于Ashby培养基上的菌落。田间一年生文冠果与田间二年生文冠果的根系内生菌情况存在差异。一年生文冠果的根系内生菌数量与种类略多于二年生文冠果。一年生文冠果根系中分离得到的主要内生菌为成团泛菌(Pantoea agglomerans)、根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)和产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)等;田间二年生文冠果根系中分离得到的主要内生菌为假单胞菌属(Pseudomonas)细菌。固氮活性测定结果表明,在所分离的7个菌株中,6个测到了固氮酶活性,其中鉴定为产酸克雷伯菌的菌株固氮酶活性显著高于其他菌株,达到9.688nmol·mg-1·h-1,为文冠果固氮菌肥的菌种的筛选奠定了基础。