Asia-Ⅰ口蹄疫病毒P1-2A基因真核表达质粒的构建及小鼠免疫试验

目的 构建含有Asia-Ⅰ型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A 基因的真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A，并用pVAXⅠ-P1-2A免疫小鼠，评价其体液免疫和细胞免疫水平。方法 通过RT-PCR 方法扩增得到含有FMDV P1-2A编码区的目的基因，并将其克隆到pMD18-T载体上。将pMD18-T-P1-2A和 pVAXⅠ分别经EcoRⅤ和XbaⅠ双酶切后连接构建真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A。将酶切鉴定正确后的重组质粒转染HeLa细胞进行IFA检测。再进行小鼠血清特异性抗体试验、小鼠T淋巴细胞增殖试验和IFN-γ ELISPOT试验。结果 酶切结果与预期目的条带大小相符；荧光结果表明经pVAXⅠ-P1-2A转染的细胞有明显的黄绿色荧光，说明P1-2A基因在HeLa细胞中得到了表达；小鼠免疫结果表明，用免疫的小鼠都产生了较强的体液免疫和细胞免疫，并且T淋巴细胞增殖数和产生IFN-γ的细胞数和对照组相比显著提高(P<0.05)。间接ELISA试验表明，在免疫第14天抗体水平比对照组明显增高(P<0.05)。结论 成功构建了真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A,并通过小鼠免疫试验发现重组质粒试验组能够诱导产生特异性的体液免疫和细胞免疫应答。     

犬源乳酸菌高密度培养条件的优化

本文研究了犬源乳酸菌生长繁殖的环境条件（温度、接种量、起始pH等）和培养基组成（氮源、碳源等）,优化确定了犬源乳酸菌密度培养的适宜培养条件为：起始pH为6.5,培养温度为37℃,培养基配比为麦芽糖∶乳糖（1∶1）2%、牛肉浸膏1.0%、缓冲盐A0.5%,NaCl 0.25%,MgSO40.1%,接种量5%,结合优化的培养条件,可使犬源乳酸菌活菌数得到进一步提高。     

Asia-I口蹄疫病毒P1-2A基因真核表达质粒的构建及小鼠免疫试验

目的:构建含有Asia-Ⅰ型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A 基因的真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A,并用pVAXⅠ-P1-2A免疫小鼠,评价其体液免疫和细胞免疫水平.方法:通过RT-PCR 方法扩增得到含有FMDV P1-2A编码区的目的基因,并将其克隆到pMD18-T载体上.将pMD18-T-P1-2A和 pVAXⅠ分别经EcoRⅤ和XbaⅠ双酶切后连接构建真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A.将酶切鉴定正确后的重组质粒转染HeLa细胞进行IFA检测.再进行小鼠血清特异性抗体试验、小鼠T淋巴细胞增殖试验和IFN-γ ELISPOT试验.结果:酶切结果与预期目的条带大小相符;荧光结果表明经pVAXⅠ-P1-2A转染的细胞有明显的黄绿色荧光,说明P1-2A基因在HeLa细胞中得到了表达;小鼠免疫结果表明,免疫的小鼠都产生了较强的体液免疫和细胞免疫,并且T淋巴细胞增殖数和产生IFN-γ的细胞数和对照组相比显著提高(P<0.05).间接ELISA试验表明,在免疫第14天抗体水平比对照组明显增高(P<0.05).结论:成功构建了真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A,并通过小鼠免疫试验发现重组质粒试验组能够诱导产生特异性的体液免疫和细胞免疫应答.     

Asia-Ⅰ口蹄疫病毒P1-2A基因真核表达质粒的构建及小鼠免疫试验术

目的：构建含有Asia-Ⅰ型口蹄疫病毒（FMDV）衣壳蛋白前体P1-2A基因的真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A，并用pVAXⅠ-P1-2A免疫小鼠，评价其体液免疫和细胞免疫水平。方法：通过RT-PCR方法扩增得到含有FMDV P1-2A编码区的目的基因，并将其克隆到pMD18-T载体上。将pMD18-T-P1-2A和pVAXⅠ分别经EcoRⅤ和XbaⅠ双酶切后连接构建真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A。将酶切鉴定正确后的重组质粒转染HeLa细胞进行IFA检测。再进行小鼠血清特异性抗体试验、小鼠T淋巴细胞增殖试验和IFN-γ ELISPOT试验。结果：酶切结果与预期目的条带大小相符；荧光结果表明经pVAXⅠ-P1-2A转染的细胞有明显的黄绿色荧光，说明P1-2A基因在HeLa细胞中得到了表达；小鼠免疫结果表明，免疫的小鼠都产生了较强的体液免疫和细胞免疫，并且T淋巴细胞增殖数和产生IFN-γ的细胞数和对照组相比显著提高（P〈0．05）。间接ELISA试验表明，在免疫第14天抗体水平比对照组明显增高（P〈0．05）。结论：成功构建了真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A，并通过小鼠免疫试验发现重组质粒试验组能够诱导产生特异性的体液免疫和细胞免疾应答。