双峰驼胎儿耳缘组织成纤维细胞系的建立及其生物学特性鉴定

本研究旨在建立双峰驼胎儿耳缘组织成纤维细胞系.采集双峰驼胎儿耳缘组织,用植块培养法和消化分离法对其进行原代培养,差速消化和差速贴壁法进行继代培养和细胞纯化,并对培养细胞的形态、细胞活力、生长动力学、免疫组织化学、核型、绿色荧光蛋白基因质粒(GFP)转染表达以及微生物污染等生物学特性进行了分析.结果表明,原代和传代细胞形态正常,群体倍增时间(PDT)为47.2 h,细胞生长较快;不同代数的染色体众数为2n =74;免疫组织化学鉴定波形蛋白抗体呈阳性,角蛋白抗体呈阴性;外源质粒能在该细胞内整合和正确表达;微生物污染检测呈阴性.因此该研究已成功建立了双峰驼胎儿耳缘组织成纤维细胞系,在细胞水平上保存了双峰驼这一国家重要种质资源,为基因组文库和体细胞克隆等研究提供了理想的生物材料.     

基于iTRAQ蛋白定量技术对多浪羊不同生理时期卵巢候选蛋白生物标志物的筛选

应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术筛选多浪羊(Dolang sheep)发情期、发情间期和妊娠期差异表达蛋白质,为发情调控与鉴定、早期妊娠诊断等研究提供基础.通过iTRAQ并结合液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术,鉴定出4845个蛋白,其中显著差异蛋白470个.与发情间期相比,发情期上调蛋白18个,下调蛋白102个,妊娠期上调蛋白20个,下调蛋白60个;与发情期相比,妊娠期上调蛋白50个,下调蛋白24个;上调蛋白中有 cyclin-Y isoform X1,cleavages timulation factor subunit 1 isoform X1,follistatin-related protein 1 isoform X2,nicotinate phosphoribosyltransferase isoform X1,下调蛋白中 hemopexin isoform X1,apolipoprotein A-Ⅱ,nucleophosmin等蛋白与激素生成、发情调控、合子的产生与凋亡、早期胚胎附植及胚胎发育等功能有关,其中相对于发情期和发情间情期,cyclin-Y isoform X1和nicotinate phosphoribosyltrans-ferase isoform X1在妊娠期显著上调.试验通过iTRAQ蛋白质组学技术鉴定出的多浪羊发情及妊娠相关的差异蛋白质,为进一步探索绵羊发情鉴定和早期妊娠诊断候选生物标志物提供了新的思路和方法.